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目的:本研究旨在探讨lncRNA DANCR促进滑膜间充质干细胞增殖和诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化的机制,以期为滑膜间充质干细胞向软骨组织分化和增殖提供理论基础。方法:(1)术中收集患者的关节液标本,提取患者关节液中的SMSCs,在体外培养扩增、纯化、诱导并对其进行鉴定。(2)敲低和过表达SMSCs中的lncRNA DANCR,同时设立空白对照组,通过CCK-8实验、Sox9、Col II在mRNA和蛋白质水平的表达情况等来检测SMSCs的增殖和软骨细胞分化能力。(3)通过生信预测分析、双荧光素酶报告基因实验、RIP等确定lncRNA DANCR的靶基因是否为miR-1275;过表达lncRNA DANCR的同时敲低miR-1275以及敲低lncRNA DANCR的同时过表达miR-1275以再次佐证。(4)Taget Scan生信预测分析、双荧光素酶报告基因实验确定MMP-13mRNA是否为miR-1275的靶基因;敲低和过表达miR-1275,以再次佐证。(5)敲低和过表达lncRNA DANCR后检测MMP-13在mRNA和蛋白质上水平;过表达lncRNA DANCR的同时敲低MMP-13以及敲低lncRNA DANCR的同时过表达MMP-13检测SMSCs的增殖活性和分化能力,以验证lncRNA DANCR对于MMP-13的调节作用。结果:(1)从患者关节液中获取的SMSCs,其细胞形态大致均一、呈梭形分布;有间充质干细胞特定的表面抗原;在一定诱导的培养条件下,SMSCs可以向软骨细胞、骨细胞、脂肪细胞等不同方向分化。(2)CCK-8显示:过表达lncRNA DANCR的SMSCs的细胞增殖速度显著快于空白对照组,并且软骨特异性标志物Sox9、Col II在mRNA和蛋白质上的水平表达增加;而敲低lncRNA DANCR的表达则出现相反的结果。(3)通过miRcode数据库我们发现miR-1275在3’-UTR处通过碱基互补配对与DANCR结合;qRT-PCR检测显示:敲低和过表达lncRNA DANCR,SMSCs中的miR-1275水平分别增加和减少;RIP实验结果显示SMSCs Ago-2抗体明显富集lncRNA DANCR和miR-1275;双荧光素酶报告基因实验显示miR-1275组中lncRNA DANCR荧光较DANCR突变组明显减少,miR-1275敲低组中则反之;lncRNA DANCR过表达时增加了SMSCs的增殖能力,上调了Sox9和Col II的表达,而过表达miR-1275却逆转了这一效应,此外敲低miR-1275的表达可增强lncRNA DANCR过表达时对SMSCs增殖和软骨分化的影响。(4)Taget Scan生信预测分析得知MMP-13mRNA是miR-1275的靶基因;双荧光素酶报告基因实验显示miR-1275降低了MMP13-WT组的荧光素酶活性;过表达SMSCs中的miR-1275时,在mRNA和蛋白质水平上SMSCs中的MMP-13明显表达降低;敲低SMSCs中miR-1275的表达则出现结果相反。(5)敲低lncRNA DANCR的表达降低了SMSCs中的MMP-13蛋白水平,过表达lncRNA DANCR则结果相反反之;敲低MMP-13的表达可消除lncRNA DANCR过表达时对SMSCs的增殖和分化的影响。结论:lncRNA DANCR可以通过miR-1275/MMP-13诱导滑膜间充质干细胞增殖和向软骨分化。