乳铁蛋白是一种分泌蛋白,具有天然防御、杀菌、抗肿瘤等多种功能,是人体不可缺少的蛋白质,对它的分离与纯化有很重要的意义。乳铁蛋白分子结构中含有结合铁的特殊结构域,因而具有较高的铁结合能力,而乳铁蛋白中的铁可以通过金属螯合剂被去除,从而制备得到脱铁乳铁蛋白。脱铁乳铁蛋白具有抗菌、抗肿瘤等重要的功能,可以作为一种药物使用。根据乳铁蛋白分子中结合铁的这一特性,本文建立了从复杂基质中固相萃取乳铁蛋白的新方法。SiO2和Tb3+以硅烷偶联剂相连接,制备得到铽修饰的二氧化硅复合材料Tb@SiO2,通过FT-IR、XRD、TEM和EDS进行表征,表明制备得到了球形材料,且经ICP-OES测定知,材料中Tb的质量分数为4.5%。按照设定的机理,Tb@SiO2对脱铁乳铁蛋白展现出了良好的吸附效果,从而建立了高效、高选择性的从复杂牛奶样品中提取脱铁乳铁蛋白的固相萃取新方法。Tb@SiO2对脱铁乳铁蛋白的吸附行为符合Langmuir吸附模型,吸附容量为262.5 mg g-1。与材料结合的脱铁乳铁蛋白可用0.01 mol L-1 FeCl3溶液进行洗脱,洗脱效率为88.4%。对牛奶乳清样品进行调节pH和用螯合剂去除铁,使乳铁蛋白转变为脱铁乳铁蛋白,用所得材料对此样品中的脱铁乳铁蛋白进行分离纯化。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,该方法分离得到的脱铁乳铁蛋白具有较高的纯度。圆二色光谱测定结果表明,经过吸附和脱附过程得到的脱铁乳铁蛋白的二级结构基本不变。最后,得到的脱铁乳铁蛋白在pH 7.0和CO32-的协同作用下重新与Fe3+结合,恢复到最初的乳铁蛋白形式。得到的乳铁蛋白与标准乳铁蛋白的圆二色光谱基本一致,且经测定铁含量,证实两者的铁饱和度也一致,表明乳铁蛋白经脱铁处理后得到的脱铁乳铁蛋白可以再次转化成乳铁蛋白。