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苹果树腐烂病（appletreeValsacanker）主要危害主枝、主干，造成死枝、死树，甚至毁园，严重威胁苹果产业的发展。腐烂病菌在枝干木质部内生长扩展是导致剪锯口发病和旧病斑复发的重要原因。为了揭示腐烂病菌在枝干木质部内的生长扩展机制，深入了解腐烂病的发生流行规律，通过菌饼接种离体和活体富士苹果枝条剪口，检测病菌在木质部内生扩展距离，研究了温度、枝条相对含水量、枝条龄期等因子对腐烂病菌在木质部内生长扩展的影响；系统监测了腐烂病菌在枝条木质部内的周年生长扩展动态；测试了病菌在枝条不同组织配制培养基内生长速度；测定了不同枝条内的营养物质含量及其对腐烂病菌生长的影响；克隆了一类纤维素酶基因，以内切葡聚糖酶基因为代表，分析了内切葡聚糖酶对腐烂病菌在木质部生长过程中的作用。 腐烂病菌能够利用木质部内的水溶性养分在木质部内生长扩展。病菌在木质部内的生长扩展速度显著快于在皮层内的生长速度。在5-35℃的范围内，腐烂病菌在苹果枝条木质部和皮层内都能生长扩展，最适温度为30℃；当枝条的相对含水量大于90%时，腐烂病菌在木质部内的生长扩展速度较快，当枝条的含水量低于90%时，病菌的生长扩展受到明显地抑制；腐烂病菌在当年生枝条木质部内的生长扩展速度显著快于在2-3年生枝条木质部内的扩展速度；在高温处理枝条木质部内，腐烂病菌的扩展速度显著快于未处理枝条；自然条件下，接种到枝条剪锯口上病菌的生长扩展速度主要受温度的影响，12月至次年3月份，腐烂病菌在活体的富士枝条内扩展速度很慢，3-11月份扩展较快。 不同采集时间、不同品种间、枝条不同部位内可溶性糖、可溶性蛋白及各种矿质元素的含量差异显著，对腐烂病菌在枝条内生长扩展的影响较大。在2月份苹果休眠期采集的苹果枝条内，可溶性糖和可溶性蛋白的含量显著高于10月份苹果落叶之前采集苹果枝条内的含量；腐烂病菌在2月份休眠枝条木质部和韧皮部内的生长扩展速度显著快于10月份采集的苹果枝条；腐烂病菌在2月份采集枝条制作液体培养基内的生长量显著大于在10月份采集枝条制作培养基内的生长量。不同苹果品种枝条内可溶性糖、可溶性蛋白的含量虽有差异，但不及不同时期采集枝条内的含量差异大，腐烂病菌在不同品种枝条上的生长扩展速度也存在差异，但也不及在不同时期采集枝条上的扩展速度差异大。在2月份采集的早期落叶枝条韧皮部所制作的液体培养基中，腐烂病菌的生长量显著小于未落叶枝条韧皮部制作液体培养基内的生长量。 从苹果腐烂病菌中克隆了一个内切葡聚糖酶基因，命名为glucanaseI（GenBank登录号为MG869705）。该基因开放阅读框长度为1008bp，编码335个氨基酸，其码蛋白的分子量约34.25kDa，等电点为4.76，无信号肽。SDS-PAGE分析表明在大肠杆菌中成功表达了一个分子量约为60kDa的融合蛋白，融合蛋白的可溶性检测表明，低温诱导下主要以可溶性蛋白的形式存在，WesternBlot印迹检测也证实大肠杆菌Rosseta中表达了一个分子量约为60kDa的蛋白质。利用实时荧光定量PCR分析该基因在腐烂病菌接种离体枝条4h后glucanaseI的表达量达到峰值，接种活体枝条8h后达到峰值，约为离体枝条中基因表达量的1.96倍，结果表明腐烂病菌在苹果枝条木质部内生长扩展初期，glucanaseI起着较为重要的作用。 通过RNAi技术，选取了6个内切葡聚糖酶基因表达量降低的转化子，在转化子KD-324F12中，除1065、1341基因外，其他基因的表达量为对照的53%-87%；在转化子KD-324F9中，除1287、1341基因外，其他基因的表达量为对照的42%-82%；在转化子KD-201R3中，1065基因的表达量为对照的37%。转化菌株在枝条木质部内的生长扩展速度与野生菌株没有显著差异，结果暗示腐烂病菌在苹果枝条木质部的扩展中，内切葡聚糖酶并不是病菌生长所必不可缺少的酶类。