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本试验以组织块法分离培养,采用刮除法和相差消化法纯化传代获取山羊乳腺上皮细胞,以2~3代的细胞为对象,研究大豆苷、染料木苷、淫羊藿苷和桔梗总皂苷对其增殖和αsl和β两种酪蛋白基因表达的影响。
1山羊乳腺上皮细胞的培养及鉴定
运用组织块法分离培养山羊乳腺上皮细胞,经形态学和免疫组化鉴定为上皮细胞,采用刮除法和相差消化法纯化细胞,并用0.25%胰蛋白酶和0.04%EDTA进行传代,传代初始细胞活力保持良好,形态均一。传至20代,细胞活力下降。至25代,细胞开始凋亡。传至30代细胞发生完全凋亡。本章试验结果为山羊乳腺上皮细胞系的建立奠定了基础。
2苷类物质对山羊乳腺上皮细胞增殖的影响
采用MTT法研究了不同浓度的大豆苷、染料木苷、淫羊藿苷和桔梗总皂苷对山羊乳腺上皮细胞增殖的影响。结果表明:苷类纳克级别浓度组较微克级别浓度组对细胞增殖的影响更明显;处理细胞48h较24h和72h对细胞增殖的影响更明显;10ng/mL大豆苷显著促进山羊乳腺上皮细胞增殖;10ng/mL和100ng/mL染料木苷显著促进山羊乳腺上皮细胞增殖;山羊MEC增殖与淫羊藿苷纳克级别浓度有一定的剂量依赖性关系,而且所有浓度处理组(1、5、10、100和1000ng/mL)都能显著促进细胞增殖;说明这三种苷能促进细胞增殖。低浓度(1和5ng/mL)桔梗总皂苷能抑制细胞的增殖。
3苷类物质对山羊乳腺上皮细胞酪蛋白基因表达的影响
应用Real Time PCR测定不同浓度的四种苷处理细胞48h后对伍αsl和β两种酪蛋白基因相对表达量的影响。结果表明:低浓度(1ng/mL、10ng/mL)的大豆苷有所提高αsl-酪蛋白基因的表达,10ng/mL的大豆苷有所提高β-酪蛋白基因的表达;10ng/mL和100ng/mL的染料木苷显著提高αsl-酪蛋白基因的表达,1和10ng/mL的染料木苷能显著提高β-酪蛋白基因的表达量,10ng/mL染料木苷是提高酪蛋白基因表达的最优浓度;1ng/mL、10ng/mL和100ng/mL三种浓度的淫羊藿苷都能提高αsl-酪蛋白和β-酪蛋白基因的表达,随着浓度的提高,促进作用更明显,即有剂量依赖性;1和100ng/mL桔梗总皂苷提高细胞αsl-酪蛋白基因的表达,1和10ng/ml桔梗总皂苷提高β-酪蛋白基因的表达量,100ng/mL为提高αsl-酪蛋白基因表达的最佳浓度,10ng/mL为促进β-酪蛋白基因表达的最佳浓度。