论文部分内容阅读
nsdA基因最初是由本实验室发现,该基因对链霉菌分化有负调控作用。根据天蓝色链霉菌全基因组序列,运用Blast方法检索分析发现基因SCO7252和SCO1593与之有高度的同源性,并且这三个基因的蛋白产物中都含有一个类TPR结构。本研究于是进行了一系列的实验来检测基因SC07252和SCO1593的生物学功能。
首先运用PCR-targeting的方法分别构建了基因SCO7252和SCO1593的中断载体,通过接合转移的方法将它们导入天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)A3(2)的M145菌株中,成功地将基因SCO7252和SCO1593进行了中断并分别筛选到三株双交换菌株。在MS平板上分别观察两个基因中断菌株的表型,观察发现SCO7252中断菌株的放线紫红素和钙依赖抗生素产量较之野生型M145增多,但在形态分化方面没有区别;SCO1593表型与野生型M145菌株相比没有很明显的不同。
因为基因SCO7252中断菌株ZL2表型与基因nsdA中断菌株LW9的产素量都提高,我们依照nsdA的命名方法命名SCO7252为nsdB。RT-PCR结果显示nsdB基因与基因nsdA相似,也在培养30 h后开始表达。为了研究这两个基因间的相互关系,本研究又分别构建了能在LW9中使用的含完整的nsdB互补序列的单拷贝和多拷贝质粒载体,以及能在ZL2中使用的含完整的nsdA互补序列的单拷贝和多拷贝质粒载体。将载体分别导入LW9和ZL2中,在MS上观察表型发现菌株LW9中引入含nsdB基因完整互补片断的高拷贝质粒pHLA24后其表型能恢复到野生型水平。