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精原干细胞(Spermatogonial stem cells, SSCs)是成年动物体内具有自我更新及定向分化潜能的一种成体干细胞,对于维持成年动物体精子发生和传递遗传物质具有重要作用。长链非编码RNA是哺乳动物细胞内普遍表达的一类非编码RNA,具有广泛的生物学功能。本研究检测了AK005183的组织差异表达及其对GDNF和维甲酸的应答;构建了其干扰载体;检测了其对细胞增殖的影响及对SSCs自我更新相关基因的影响。主要研究结果如下:(1)利用胚胎干细胞长链非编码RNA表达谱,挑选出30个lncRNA;通过RT-PCR检测出了19个在睾丸组织,GC-1spg细胞系及C18-4细胞系中表达的长链非编码RNA。经筛选,确定AK005183为研究对象。对AK005183转录本进行了生物信息学分析,比较了与其同源的另外两个转录本。根据EGO DataSets数据库中GDNF和GFRal对AK005183的影响,我们预测其可能存在于GDNF信号通路中。利用维甲酸体外诱导SSCs的分化,发现AK005183随着SSCs分化表达水平降低,暗示其可能与SSCs的自我更新与分化相关。组织差异表达实验发现AK005183在不同组织和细胞系中表达差异很大,并在睾丸组织中丰度最高;阶段发育表达实验表明AK005183在1d、3d、5d、7d、10d、14d、20d、成年小鼠睾丸中表达水平稳定。(2)综合利用shRNA设计软件等方法,设计、合成了干扰AK005183和对照shRNA序列,并成功构建其CD513B-U6载体,测序结果表明连接成功。我们进而将干扰质粒及对照质粒转染NIH3T3细胞系,实时定量PCR检测所构建的AK005183干扰载体具有较好的干扰效果。我们利用第三代慢病毒包装系统,将CD513B-U6、pGag-Pol、 pRsv-rev、pVSV-G质粒转染293T细胞系,包装得到病毒滴度为6.35×106TU/mL的干扰慢病毒。(3)将干扰AK005183及对照慢病毒转导GC-1spg细胞系,用嘌呤霉素进行筛选,最终建立了能将AK005183稳定干扰64%的GC-1spg细胞株,CD513B-U6-NC及CD513B-U6对照细胞株。BrdU检测结果表明干扰AK005183后,处于增殖状态的GC-1spg细胞比例升高。检测干扰AK005183后对在SSCs中表达的一些功能基因的影响,结果发现AK005183能够影响KitL、Etv5与Bcl6b等基因的表达,暗示其可能与SSCs的自我更新和分化相关。