小鼠精原干细胞长链非编码RNA鉴定及其功能的初步研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangpeng532
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
精原干细胞(Spermatogonial stem cells, SSCs)是成年动物体内具有自我更新及定向分化潜能的一种成体干细胞,对于维持成年动物体精子发生和传递遗传物质具有重要作用。长链非编码RNA是哺乳动物细胞内普遍表达的一类非编码RNA,具有广泛的生物学功能。本研究检测了AK005183的组织差异表达及其对GDNF和维甲酸的应答;构建了其干扰载体;检测了其对细胞增殖的影响及对SSCs自我更新相关基因的影响。主要研究结果如下:(1)利用胚胎干细胞长链非编码RNA表达谱,挑选出30个lncRNA;通过RT-PCR检测出了19个在睾丸组织,GC-1spg细胞系及C18-4细胞系中表达的长链非编码RNA。经筛选,确定AK005183为研究对象。对AK005183转录本进行了生物信息学分析,比较了与其同源的另外两个转录本。根据EGO DataSets数据库中GDNF和GFRal对AK005183的影响,我们预测其可能存在于GDNF信号通路中。利用维甲酸体外诱导SSCs的分化,发现AK005183随着SSCs分化表达水平降低,暗示其可能与SSCs的自我更新与分化相关。组织差异表达实验发现AK005183在不同组织和细胞系中表达差异很大,并在睾丸组织中丰度最高;阶段发育表达实验表明AK005183在1d、3d、5d、7d、10d、14d、20d、成年小鼠睾丸中表达水平稳定。(2)综合利用shRNA设计软件等方法,设计、合成了干扰AK005183和对照shRNA序列,并成功构建其CD513B-U6载体,测序结果表明连接成功。我们进而将干扰质粒及对照质粒转染NIH3T3细胞系,实时定量PCR检测所构建的AK005183干扰载体具有较好的干扰效果。我们利用第三代慢病毒包装系统,将CD513B-U6、pGag-Pol、 pRsv-rev、pVSV-G质粒转染293T细胞系,包装得到病毒滴度为6.35×106TU/mL的干扰慢病毒。(3)将干扰AK005183及对照慢病毒转导GC-1spg细胞系,用嘌呤霉素进行筛选,最终建立了能将AK005183稳定干扰64%的GC-1spg细胞株,CD513B-U6-NC及CD513B-U6对照细胞株。BrdU检测结果表明干扰AK005183后,处于增殖状态的GC-1spg细胞比例升高。检测干扰AK005183后对在SSCs中表达的一些功能基因的影响,结果发现AK005183能够影响KitL、Etv5与Bcl6b等基因的表达,暗示其可能与SSCs的自我更新和分化相关。
其他文献
现阶段,预算管理作为财政预算制度要求的重要高校财务管理办法之一,而且预算控制也作为内部控制所规定的主要控制方法。下文主要对高校预算管理现状进行详细的分析,并根据内
政工工作是国有发电企业发展过程中的基础工作,对于国有发电企业的持续稳定发展有着非常重要的意义。在市场竞争越来越激烈的背景下,加强政工队伍的培养,提升政工队伍的素质
本文研究以引黄沉砂为主要原料,以少量胶凝材料为结合剂,再添加少许辅料,采用半干压成型,自然养护工艺试制蒸免烧砖,并对其强度形成机理进行了初步探讨。
近年来,新乡市平原示范区全面贯彻落实黄河流域生态保护和高质量发展战略,立足沿黄生态经济带建设,把发展产业作为脱贫致富的根本之策,把培育产业作为推动脱贫攻坚的根本出路,结合滩区实际情况,谋划了一批符合滩区产业发展定位、利于贫困群众脱贫增收的产业项目,形成了具有滩区特色的产业扶贫体系。   因地制宜,主攻特色产业   平原示范区滩区面积126平方公里,围绕“三园”建设,结合滩区水土现状,依托现有产业基
本文以两种典型分化壳剖面为例,对风化壳中稀土元素的分布和形成特征进行了讨论。研究认为,它们在风化壳中的富集和分异,受风化壳的结构、土的物理和水理性质、化学和矿物成分以
介绍了液压支架油缸用密封件的材料、结构、制造技术,提出了对密封理论的新认识;通过实践,达到了理想的使用效果。
目的:为完善我国生物类似药的注册监管提供参考。方法:以日本生物类似药研发注册审评政策为研究对象,分析其注册审评流程及核心特征,并探讨政策实施效果。结果与结论:日本注
本文通过显微镜测试不同泡沫掺量的陶粒泡沫混凝土的孔结构,并通过力学性能测定,总结出孔结构对性能的影响,为推广应用陶粒泡沫混凝土提供了理论依据。
近年来,创新创业教育在国内各高校如火如荼的展开。针对新建地方本科院校在转型发展过程中,人才培养模式在创新创业方面面临的困境,提出了通过加强宣传力度、申报项目和参加比赛
目前国内外对药物引发的心电图QT间期延长非常重视,国外已在新药研究中进行了对QT间期延长的研究工作,但在国内新药研究中尚未见到开展相关的工作.参考FDA(ICH)于2005年5月颁