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猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis Virus, TGEV)属于冠状病毒科冠状病毒属，其可导致猪传染性胃肠炎。对养猪业危害性极大。抗毒素和抗生素等常规药物对本病无任何治疗作用，预防该病的有效方法是疫苗接种。本研究以猪传染性胃肠炎病毒感染的乳猪小肠病料为材料，自行设计两对引物，通过套式（RT-nested）PCR及普通的RT-PCR扩增出猪传染性胃肠炎病毒M基因全序列，经测序、同源性比较后，进行深入的分析，主要研究结果如下： 1．本试验以乳猪小肠组织病料为材料，用Trizol法提取总RNA，经甲醛凝胶变性电泳，能清晰的看到28s、18srRNA两条亮带以及一条较弱的5srRNA带。结果表明，所提取的RNA完整性好，没有发生降解，完全可以用于RT-PCR反应。 2．根据GeneBank中发表的猪传染性胃肠炎病毒M基因序列，利用软件设计两对引物（外引物和内引物），在普通的RT- PCR方法基础上，建立了 RT-nested PCR体系，扩增出猪传染性胃肠炎病毒M基因的全序列，使用内外引物扩增的片段长度分别为1037bp、1328bp 。结果表明，用双引物的RT-nested PCR较普通的RT- PCR扩增方法更具特异性，重复性好，能很好的避免病毒检测时假阳性的出现。且较传统的方法如电镜技术、免疫荧光技术、ELISA等更方便可靠，完全可以作为一种新型的、特异性强的病毒检测的方法。 3．利用 RT- PCR 方法，扩增出猪传染性胃肠炎病毒 M 基因全序列，长度为 1 328 bp，扩增产物经回收、转化,克隆在 pGEM-T Easy 载体的 T 位点上。用 EcoRⅠ酶切鉴定重组质粒 DNA，挑选出阳性克隆菌，进行序列测定后。利用 CLUSTAL（1.82）软件进行同源性分析。结果显示，扩增的猪传染性胃肠炎病毒 M 基因序列与 GeneBank 中登录号为AY587883 和 AF302262 的猪传染性胃肠炎病毒 M 基因的核苷酸序列同源性分别为 97.2%，97.3%。氨基酸同源性分别为 97.3%，98.0％。软件分析表明，各有 22 处和 21 处碱基发生了突变，其中一处碱基发生了缺失，7 个和 5 个氨基酸发生了转换。 本研究不仅为对TGEV进行深入的分子生物学研究提供了资料，为其基因工程疫苗的研制奠定了基础，并且也为该病毒的鉴定提供了一个便捷有效的方法，对猪传染性胃肠炎的防治有重要的现实意义。