STAT3、Cyclin D1蛋白在EGCG促进鼻咽癌细胞CNE-2凋亡中的表达变化及意义

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目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,简称NPC)系恶性程度较高的头颈部肿瘤,在世界各大洲均有发现,但欧洲、美洲、大洋洲和拉丁美洲国家较少,东南亚较高发,但日本和朝鲜鼻咽癌发病率均低于1/10万。它在我国则是一种常见的恶性肿瘤,且分布具有明显的地区性差异,广东、广西、福建、湖南等省发病率较高。现今鼻咽癌的治疗以放疗为主辅以化疗或手术等综合性治疗。Ⅰ期病例的综合治疗5年生存率可达95%,而Ⅳ期病人则仅为35%。大量研究表明,表没食子儿茶素没食子酸酯能够有效地降低肠癌、肺癌的的发生,并具有抑制肿瘤生长的作用。本试验主要在于观察EGCG在体外的情况下对鼻咽癌CNE2细胞的影响,同时分析STAT3信号通路中的STAT3、Cyclin D1的蛋白表达变化,探讨STAT3信号通路在鼻咽癌发生发展过程中的机制,进一步分析EGCG在促进CNE2细胞凋亡中的作用。方法:1.用不同浓度的EGCG分别处理CNE2细胞24h、48h、72h后,利用MTT比色法检测细胞增殖的情况,算出增殖抑制率。2.使用Hoechst33258荧光染色法观察经过不同浓度EGCG处理后的CNE2细胞,观察细胞凋亡情况,计算凋亡率。3.分别用流式细胞仪检测经过不同浓度EGCG处理过的CNE2细胞,观察其对鼻咽癌细胞周期的影响。4.通过蛋白印迹技术western blot方法检测不同浓度的EGCG对CNE2细胞中STAT3、Cyclin D1的不同时间点的表达变化的影响。结果:1. MTT比色法结果显示,当提高EGCG的浓度及作用时间延长时,EGCG对CNE2细胞的增殖抑制作用增强,且呈浓度与时间依赖性(p<0.05)。2. Hochest荧光染色的结果显示,EGCG处理CNE2细胞后出现了典型的凋亡的细胞形态学改变。与对照组比较,随着EGCG浓度的增加,凋亡细胞数不断增多(p<0.05)。3.流式细胞仪检测不同浓度的EGCG分别干预后CNE2细胞24h、48h后,停滞在S、G1/G0的细胞与对照组相比,随着浓度的提高而增多。4. Western blot检测经过EGCG干预后的CNE2细胞中STAT3、CyclinD1蛋白表达量随着EGCG浓度的增加而表达降低。结论:1. EGCG可能通过下调STAT3蛋白,作为EGCG抗鼻咽癌的生物学作用机制之一。3. EGCG抑制CNE2细胞的增殖,诱导其凋亡,可能与下调Cyclin D1蛋白的表达相关。
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