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目的:1.筛选肺发育期大鼠胎肺组织差异表达的miRNA分子。2.探讨miR-431是否通过TGF-β/SMAD4信号通路参与调控人肺泡Ⅱ型上皮细胞合成肺泡表面活性物质。方法:1.采用miRNA微芯片技术,分析比较大鼠肺发育中的三个时间点孕16天(E16组)、19天(E19组)和21天(E21组)胎肺组织,筛选出差异表达的miRNA分子(miR-431).2.利用miR-431-5p的类似物和抑制物转染细胞,采用qRT-PCR和WB检测miR-431-5p 对 SP-A、SP-B、SP-C 和 SP-D 表达的调控。3.通过TargetScan软件预测miR-431的靶基因,并利用miRBase和TargetScan软件,比较miRNA-431和SMAD4的序列在不同物种间的变化情况。4.运用双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和WB验证miR-431-5p下调SPs表达的靶基因。5.利用CCK8、流式细胞仪分别检测miR-431-5p对A549细胞的增殖和凋亡的影响。结果:1.miR-431在miRNA微芯片结果中下降显著通过miRNA芯片分析比较孕16、19、21天三组胎肺组织,发现miR-431的表达在三组间[E16→E19→E21]连续下降。同时,qRT-PCR验证了该结果。qRT-PCR结果显示在E16、E19、E21组间miR-431的表达持续下调,下降趋势均有统计学意义。2.miR-431-5p能够下调SPs的表达我们进一步通过miR-431-5p的类似物mimic和抑制物inhibitor转染A549细胞,qRT-PCR和WB结果表明,miR-431-5p过表达能够下调SP-A、SP-B、SP-C和SP-D的表达。由上述结果可见,miR-431-5p可能通过下调SPs的表达参与调控PS的代谢。3.miR-431通过结合SMAD4的3’-UTR抑制SMAD4的表达生物信息学分析软件结果显示,SMAD4序列中“CGUUCUG”碱基序列和miR-431上的“CGUUCUG”序列相匹配,miR-431和SMAD4在进化上高度保守。双荧光素酶报告基因、qRT-PCR和WB实验证实,miR-431-5p通过结合SMAD4 3’-UTR的结合位点,从而下调SMAD4的表达。并且miR-431-5p在转录水平和转录后水平均可调控SMAD4的表达。4.miR-431-5p促进A549的增殖,抑制其凋亡CCK8结果显示相比mimic NC组,miR-431-5p mimic组A549的增殖速度明显增快;相比inhibitor NC组,miR-431-5p inhibitor组细胞增殖速度显著减慢。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示mimic组细胞总凋亡率均低于mimic NC组,而inhibitor组无明显差异。结论miR-431在发育期的胎肺组织中表达稳定下调。miR-431-5p作为内源性的调节因子作用于肺泡上皮,促进A549细胞的增殖,可能通过负性调控TGF-β/SMAD4信号通路,从而介导SPs的表达下调。miR-431-5p表达调控为肺发育、肺损伤性疾病提供新的干预靶点以及理论学说。