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葛根素（Puerarin,Pur）是豆科植物野葛中的主要有效成分,在临床应用广泛,主要可辅助治疗心脑梗死、突发性耳聋、促进神经功能恢复等[1-4]。Pur的生物利用度较低,由于7、4’位上有2个酚羟基形成了分子间的氢键,使得分子间的作用力增大,致其熔点变高,且Pur的脂溶性和水溶性均较差[5-6],同时,由于8位碳上的吡喃葡萄糖引起的空间位阻,使Pur不易透过肠黏膜[7-8],体内消除快,从而影响了其跨膜吸收与药效的发挥。目前,Pur在临床上使用的剂型只有注射剂和滴眼液,但是注射剂使用起来极不方便,不仅需要长期用药,患者顺应性也很差[9-10],并且注射剂还存在如血管内溶血、休克、过敏性哮喘等不良反应[11-13]。据调查,患者最容易接受的给药途径是口服给药,口服给药不仅可自主用药,还可以保护皮肤和黏膜不受损害[14-15],安全性较其他给药形式好,因此现在Pur的口服给药成为研究热点。应用制剂新技术提高药物的生物利用度,可促进药物吸收,提升患者顺应性,故本文采用制剂新技术制备葛根素壳聚糖口服纳米粒（Pur-CS-NPs）,以期改善Pur的口服生物利用度,具体研究内容如下:1.Pur-CS-NPs含量测定方法的建立建立Pur-CS-NPs有效成分含量分析方法,其色谱条件为:甲醇:水=30:70,流速1 m L/min,检测波长为250 nm,柱温30℃,所得线性关系良好,精密度、加样回收率、稳定性、重复性实验均符合要求,可以有效测定Pur含量,为后续制剂研究奠定基础。对于Pur-CS-NPs包封率的测定方法本章分别考察了透析法、超速离心法、凝胶过滤法、超滤离心法,通过考察,其他方法均无法准确测出NPs的EE,而超滤离心法操作简便,可实现多个同时测定,所得结果准确,最终选定条件为离心30 min,搅拌转速12000 r/min时可以将Pur-CS-NPs与游离Pur完全分离,且不损坏NPs的结构。2.Pur-CS-NPs制备工艺考察和处方优化分别考察离子凝胶化法和自组装法制备Pur-CS-NPs,其中离子凝胶化法考察壳聚糖（CS）浓度、CS溶液pH、三聚磷酸钠（TPP）浓度、搅拌转速、温度、滴加TPP溶液后搅拌时间等因素,确定CS浓度、CS溶液的pH、TPP浓度、搅拌转速四个影响最大的因素,并以平均粒径、PDI、EE、DL为评价指标,采用Box-Behnken效应面优化NPs的制备工艺和处方,得最后优化处方和工艺为:CS浓度为1.41 mg/m L,CS pH为4.45,TPP浓度为0.49 mg/m L,搅拌转速为558 r/min,根据优化后的处方和工艺进行平行重复实验,结果表明测得的平均粒径、PDI、EE、DL与预测值之间无较大差异,说明优化后的处方和工艺可行,建立的回归方程预测性良好。自组装法考察CS浓度、CS pH、海藻酸钠（SA）的浓度、氯化钙的浓度、搅拌速度、超声时间、超声功率、搅拌时间,经过考察选取因素CS浓度、SA浓度、CS pH、搅拌转速,采用Box-Behnken效应面优化制备工艺,得最后优化处方和工艺为:CS浓度为0.45 mg/m L,CS pH为4.33,SA浓度为0.07 mg/m L,搅拌转速为316.85 r/min,按照优化后的处方和工艺进行平行实验,结果表明平均粒径、PDI、EE、DL与预测值之间无较大差异,说明优化后的处方和工艺可行,建立的回归方程预测性良好。3.Pur-CS-NPs的表征对最优处方进行系列理化性质表征,表征内容包括混悬液和冻干NPs的外观,透射电镜,X-射线衍射分析,红外光谱分析,体外释放。结果表明,Pur-CS-NPs混悬液有明显的丁达尔现象,且稳定性良好,冻干粉的粒径、PDI、EE、DL与混悬液均无显著性差异。经过透射电镜显示NPs形态圆整,均匀、分散性良好,无粘连现象。X-射线衍射显示Pur-CS-NPs为无定形特征,且Pur的晶体衍射峰经测定显示完全消失。红外结果从指纹区特征峰的变化可以推测Pur与CS、TPP以及Pur与SA之间可能有氢键或范德华力的形成。在体外模拟人工肠液和人工胃液结果中,Pur很快就释放完全,而Pur-CS/TPP-NPs和Pur-CS/SA-NPs在8 h后还能持续释放,说明所制备的NPs可以延长药物释放,经过拟合符合Higuchi模型,且在释放过程中释放平稳,无NPs突然释放的现象,表明Pur-CS-NPs在体外释放良好。4.Pur-CS-NPs大鼠在体肠吸收研究本章分别考察不同pH值的K-R溶液、不同灌流速度对肠吸收的影响,最终确定K-R溶液pH为7.4,灌流速度为0.2 m L/min的时候吸收最佳。由Pur-CS/TPP-NPs组和Pur组对比可知,Pur-CS/TPP-NPs低、中、高剂量组的十二指肠、空肠、回肠的吸收对比Pur组分别具有显著性的差异（P<0.05）,结肠也有显著性差异（P<0.05）,且随着浓度逐渐增加,Pur-CS/TPP-NPs逐渐提高了Pur在结肠的吸收。Pur-CS/SA-NPs组与Pur组对比,低、中、高剂量组分别提高了Pur的吸收,且具有显著性差异（P<0.05）,其中每组的十二指肠、空肠、回肠、结肠四个肠段的吸收与Pur组比较分别具有显著性的差异（P<0.05）,表明Pur-CS/SA-NPs可显著提高Pur在小肠及结肠的吸收。综合结果得Pur-CS/TPP-NPs的组Ka和Papp分别是Pur组的4倍左右,Pur-CS/SA-NPs的Ka和Papp分别是Pur组的3倍左右,结果与药物动力学结果保持一致,表明所制备的NPs明显提高了Pur在小肠及结肠的吸收。5.Pur-CS-NPs药物动力学研究本章利用整体动物模型,通过给大鼠灌胃给与两种方法制备的NPs和Pur,考察Pur-CS-NPs的体内药物动力学研究,利用高效液相色谱法和液质联用（LC-MS/MS）法建立分析方法,建立LC-MS/MS分析方法,测定Pur-CS-NPs口服给药后的血药浓度,结果表明Pur-CS/TPP-NPs的AUC0-24、AUC0-∞、Tmax、Cmax分别是Pur的4.433、4.730、2.000、1.790倍,相对生物利用度提高到443.30%;Pur-CS/SA-NPs的AUC0-24、AUC0-∞、Tmax、Cmax分别是Pur的3.331、3.378、2.000、1.232倍,相对生物利用度提高到333.11%。表明两种方法均能有效包裹Pur,提高Pur的生物利用度。