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目的：年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)是引起50岁以上老年人低视力和盲的首要原因，细胞学和病理学研究提示AMD玻璃膜疣表面的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞可以发生类似细胞复制衰老的改变。本研究目的在于观察蓝光对猪RPE细胞复制衰老过程中衰老相关-β-半乳糖苷酶(senescence associated-beta-galactosidae，SA-β-Gal)的影响，为探讨蓝光损伤和复制衰老(replicative senescence)在AMD发病细胞生物学相关机制方面提供理论根据。方法：1．采用胰蛋白酶消化法培养猪原代RPE细胞，观察细胞的生长状况及特性，免疫组化及免疫荧光鉴定细胞来源。2．细胞培养融合后，传代于50ml培养瓶，第3代后将各组细胞培养瓶置于自制蓝光发光二极管(light emitting diode，LED)光源下，波长450-500nm，1小时／天；细胞表面水平光照强度分别为(500±100)1ux，(1000±200)1ux，(2000±500)1ux，光照时细胞水平面的温度变化为36.5～37.5℃；对照组为用黑纸完全包裹培养瓶。3．将各组细胞的第3代到第6代，消化后调整细胞密度为2×10~5个／ml，接种于24孔板培养24小时，加入4％多聚甲醛固定后进行SA-β-Gal活性的检测。高倍镜下观察是否有蓝色颗粒的阳性表达，随机选取5个视野计数100个细胞中阳性细胞数目，每组实验重复3次。4．将各组细胞的第3代到第6代，消化后调整细胞密度为1×10~4个／ml，接种于96孔板培养24小时，四甲基偶氮唑盐(3-[4，5-dimethylthiazol-2-yl]2，5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT)法检测细胞增殖情况。每组做6个复孔，重复3次。5．采用SPSS 12.0统计软件，所有数据用均数±标准差((?)±s)表示，经正态性检验和方差齐性检验，方差齐后进行多因素方差分析，并用LSD-t检验对各组均数之间两两比较。P≤0.05具有统计学意义。结果：1．体外培养的猪原代RPE细胞生长良好，有的呈集落式生长，细胞呈不规则形，接近融合时近六边形，传代稳定，细胞复苏效果良好，免疫组化及免疫荧光鉴定抗角蛋白抗原阳性。2．不同光照强度的蓝光作用于第3代到第6代猪RPE细胞，随着光照强度增加，细胞内出现蓝色颗粒的阳性细胞数目逐渐增多，SA-β-Gal活性增高，不同光照强度之间F=144.81，P＜0.01，除高强度与中强度光照组相比差别没有统计学意义(P＞0.05)外，其余每两组之间的差异均具有统计学意义(P＜0.05)；随着传代次数增加，细胞内出现蓝色颗粒的阳性细胞数目逐渐增多，SA-β-Gal活性增高，传代次数之间F=23.41，P＜0.01，在不同的传代次数之间，除第4代和第5代之间差异没有统计学意义(P＞0.05)外，其余每两组之间的差异均具有统计学意义(P＜0.05)。3．通过MTT法检测，细胞的增殖能力随传代次数增加而降低，不同传代次数之间F=31.16，P＜0.01，每两组之间的差异均具有统计学意义(P＜0.05)。细胞的增殖能力随光照强度增加而降低，不同光照强度之间F=86.52，P＜0.01，除中强度与低强度光照组相比差别没有统计学意义(P＞0.05)外，其余每两组之间的差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论：本研究成功的培养了猪原代RPE细胞，细胞保持正常增殖能力，免疫组化及免疫荧光鉴定抗角蛋白抗原阳性，所采用方法与人RPE细胞培养相近，来源广泛，取材不受限制，操作更方便，可以在某些方面代替人RPE细胞来进行实验方面的研究工作；应用自制的蓝光发生装置，观察了蓝光对猪RPE细胞复制衰老后SA-β-Gal阳性率的影响，证实了蓝光可以诱导体外培养猪RPE细胞复制衰老，并且传代次数增加可以促进细胞复制衰老；率先将蓝光、RPE细胞复制衰老和AMD三者结合起来，对于蓝光诱导的RPE细胞复制衰老的机制研究提供理论支持，对于阐释复制衰老在AMD的发病机制中的作用提供理论支持，为临床防治AMD的发生、发展以及预防治疗提供理论基础。本研究将复制衰老应用于眼科学的临床基础研究，对眼科临床实验新领域的开辟可能有一定意义。