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目的:口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)是侵袭能力较强,发病率最高的头颈部鳞状细胞癌(Head and Neck Squamous Cell Carcinoma,HNSCC)的亚型,在恶性肿瘤中排名第十一位。OSCC常发生复发和转移,往往伴随着较差的预后。尽管临床上可以采用综合序列策略治疗OSCC,但其五年生存率仍不到50%,这主要是由于转移或对常规化疗药物的耐药性。为提高OSCC治疗效果,改善患者预后,确定行之有效的治疗药物尤为重要。丙泊酚是一种静脉麻醉剂,已被发现在多种癌症中具有抗肿瘤作用。然而,丙泊酚在OSCC中的潜在作用和调节机制尚不清楚,本研究旨在探究丙泊酚对OSCC细胞中的作用,并探究其作用机制。方法:首先探究丙泊酚对OSCC细胞的作用,使用不同剂量的丙泊酚处理OSCC细胞系(UM-SCC6和SCC090)48h后利用Western blot,平板克隆实验和Edu增殖实验分别检测细胞凋亡和增殖情况。其次,为深入研究其作用机制,使用20ug/m L丙泊酚处理UM-SCC6 48h提取细胞总RNA后,通过高通量RNA测序技术筛选在丙泊酚处理后差异表达的基因并进行验证,从中选取了显著高表达的生长阻滞特异性5(Growth Arrest-Specific 5,GAS5)作为研究对象。接下来,我们先在UM-SCC6和SCC090细胞中利用si RNA技术敲降lnc RNA GAS5,再用20ug/m L丙泊酚处理后采用平板克隆实验和Western blot检测敲降lnc RNA GAS5对细胞增殖和凋亡的影响。最后,利用生物信息学分析lnc RNA GAS5与mi R-1297潜在结合区域,通过靶点预测找出mi R-1297可能的靶基因;荧光素酶报告实验验证GSK3β为mi R-1297的靶基因。Western blot和双荧光素酶实验检测lnc RNA GAS5,mi R-1297和GSK3β三者间的相互关系。结果:在研究中,我们发现丙泊酚以剂量和时间依赖性抑制UM-SCC6和SCC090细胞增殖并促进细胞凋亡(p<0.001)。高通量RNA测序结果显示20ug/m L丙泊酚处理UM-SCC6细胞后诱导lnc RNA GAS5表达显著增加。相反敲降lnc RNA GAS5可以部分地显著减弱丙泊酚引起的细胞凋亡的增加,回复了丙泊酚引起的增殖能力的降低(p<0.01)。高通量RNA测序数据还显示mi R-1297在丙泊酚处理后显著下调。使用生物信息学分析发现lnc RNA GAS5含有与mi R-1297潜在结合区域,敲降lnc RNA GAS5可回复丙泊酚诱导的mi R-1297表达下调。Q-RT-PCR和双荧光素酶实验结果显示lnc RNA GAS5与mi R-1297相互结合,并且过表达mi R-1297后lnc RNA GAS5的荧光素酶活性被显著回复(p<0.001)。以上结果证实lnc RNA GAS5充当mi R-1297的竞争性内源RNA。而后我们在Target Scan数据库中搜索mi R-1297的潜在靶基因,发现GSK3β3’UTR包含一个与mi R-1297“种子区”完全匹配的结合区域,双荧光素酶实验证实GSK3β为mi R-1297下游靶基因。进一步确定lnc RNA GAS5是否通过调控mi R-1297-GSK3β通路来增强丙泊酚诱导UM-SCC6和SCC090细胞凋亡,我们评估了在丙泊酚处理后lnc RNA GAS5对GSK3β和Mcl1的影响,发现敲降lnc RNA GAS5抑制了丙泊酚诱导的GSK3β增加和Mcl1减少,而使用mi R-1297抑制剂上述结果被逆转(p<0.01)。最后通过Western blot发现在同时敲降lnc RNA GAS5和过表达GSK3β的UM-SCC6细胞中,使用20ug/m L丙泊酚处理36h后细胞凋亡显著增加。结论:综上所述,丙泊酚在UM-SCC6和SCC090细胞中具有抗肿瘤活性,它通过lnc RNA GAS5-mi R-1297-GSK3β轴诱导OSCC细胞凋亡。丙泊酚有望成为OSCC化疗新药物,并为治疗OSCC提供一种新策略。