血管内皮生长因子(VEGF)作为信号蛋白,是由内皮细胞和肿瘤细胞分泌的,是其中的一个重要发挥因子,在肿瘤血管的生成过程中。它被认为是一个重要的生物标志物用于癌症的诊断,在临床上VEGF的过度表达或下调与某些人类疾病的疾病息息相关,因此开发一种快速的简便的灵敏度高的检测VEGF的方法具有很重要的意义。本研究的主要内容如下:第一章,简要介绍了 VEGF蛋白表达和肿瘤人的关系,VEGF蛋白的结构及亚型,特异性识别VEGF蛋白适配体的选择,化学发光体系的选择,提出了本课题的研究思路及方法。第二章,建立了以磁颗粒为载体,用适配体特异性地去捕获VEGF165,形成三明治夹心结构,在第二条适配体上连接ALP,使用化学发光的方法达到定量检测VEGF165的目的。对体系的发光条件进行了优化,包括洗涤液,加试剂的顺序,底物pH及测量时间,适配体的浓度,磁颗粒的体积和底物浓度。对以上方面进行优化,是发光强度达到最大。建立标准曲线,可达到检测1 ng/mL的VEGF165,选择性好,实现了 VEGF165的定量测定,与传统的ELISA相比对VEGF165的测量基本一致。第三章,把已经建立好的化学发光检测方法应用到实际的细胞样品中去检测,分别对肿瘤肝癌细胞HepG2和正常人类内皮细胞HUVEC在常氧和缺氧条件下VEGF165的分泌进行检测,以及HepG2和HUVEC单独培养和共培养条件下VEGF165分泌量的检测,HepG2细胞和HUVEC细胞的培养都是在微流控芯片中进行。检测的结果同ELISA比较基本是一致的。该方法的建立可以成功应用到细胞实际样品的检测中去,而且对细胞培养基不需要进行前处理,也可以达到所需的检测浓度。可以将适配体换成针对相应蛋白的适配体,就可以特异性检测其它蛋白,该方法可以应用到临床医学中,形成系统的检测,具有实际的应用意义和前景。