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目的:探索LFS-01对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的结肠炎模型小鼠的影响,为之后的药物研发利用奠定基础。方法:1.分组与造模。本实验将C57雄性小鼠随机分为正常对照组(Control),结肠炎模型组(DSS)和LFS-01组(LFS-01),每组10只。模型组通过给小鼠自由饮用3%(v/v)的DSS七天建立结肠炎模型。LFS-01组采用同样方法建立模型并按80mg\kg LFS-01每只小鼠每天0.2ml进行灌胃。2.探究LFS-01对DSS诱导的小鼠结肠炎的抑炎作用。每天观察记录各组小鼠体重和活动状态,实验第8天处死所有小鼠,对结肠拍照并测量结肠长度,观察炎症损伤,进行大体评分和DAI评分。对小鼠结肠组织切片并进行HE染色,观察结肠组织损伤情况,并进行结肠病理学评分。将结肠组织进行匀浆,用ELISA方法检测各组小鼠结肠组织中细胞因子IL-17和IL-22水平的变化。3.探究LFS-01对DSS诱导的结肠炎小鼠的肠黏膜屏障修复作用。采用免疫荧光检测法检测各组小鼠结肠组织中Occludin蛋白的表达。用RT-qPCR方法检测各组小鼠结肠组织中IL-17RA,IL-17RC,ACT1,Occludin,Claudin-1,ZO-1的mRNA水平表达变化。4.探究LFS-01对DSS诱导的结肠炎小鼠肠道菌群的调整作用。提取各组小鼠结肠内容物DNA,使用PCR-DGGE方法和切胶测序方法鉴定小鼠肠道菌群变化特点,并应用Illuminate Hiseq PE250 16SrDNA测序分析技术对各组小鼠肠道菌群进行组间物种差异分析、生物分类学上的比较、Beta多样性分析和Alpha多样性分析。结果:1.LFS-01对DSS诱导的小鼠结肠炎的抑制作用。DSS组小鼠七天后出现死亡且全部便血,体重下降明显(P<0.05),精神萎靡;正常组组无死亡无便血且活跃;LFS-01组无死亡少数出现轻度便血,体重下降不明显,大部分活跃。DSS组的结肠长度(4.36±0.25CM)明显短于对照组(6.79±0.21CM)(P<0.05),疾病活动指数(DAI)明显高于正常组(P<0.05),且结肠组织损伤严重;LFS-01组结肠长度(5.2±0.25CM)明显长于DSS组(P<0.05),DAI评分明显下降(P<0.05),结肠组织损伤有缓解。ELISA检测结果显示与模型组相比LFS-01组小鼠结肠组织IL-17水平稍有增加但无明显差异(P>0.05),IL-22水平稍有增加也无明显差异(P>0.05)。结肠炎模型组小鼠结肠隐窝损坏并出现出血和溃疡,与正常对照组相比结肠明显变短,并且模型组小鼠的大体评分、DAI评分和结肠组织损伤评分及病理评分等指标都明显高于正常组和LFS-01组,说明该建模比较成功;LFS-01组小鼠结肠长度与模型组小鼠相比明显较长,大体评分和DAI评分、结肠组织损伤评分及病理评分等指标均较低,组织损伤较轻。说明LFS-01对DSS诱导的小鼠结肠炎有明显缓解作用。2.LFS-01对DSS诱导的结肠炎小鼠的肠黏膜修复作用。免疫荧光结果显示,正常组和LFS-01组小鼠的结肠组织中Occludin蛋白表达明显高于模型组。RT-qPCR结果显示,LFS-01组结肠组织中IL-17RA,IL-17RC,ACT1,Occludin,Claudin-1,ZO-1的mRNA水平表达明显高于模型组(P<0.05)。但模型组的IL-17RA、IL-17RC和Occludin水平与正常组无明显差异(P>0.05)。说明DSS诱导的结肠炎会严重破坏肠黏膜屏障功能,LFS-01能修复DSS诱导的结肠炎引起的肠黏膜屏障损坏。3.LFS-01对DSS诱导的结肠炎小鼠肠道菌群的调整作用根据PCR-DGGE的凝胶成像图显示,结肠炎模型组小鼠的肠道菌群与正常组小鼠的肠道菌群数量和结构之间存在着明显的差异:两组之间存在许多不同的条带,并且结肠炎模型组小鼠的肠道菌群条带数与正常组小鼠相比明显减少。各组小鼠结肠内容物16SrDNA高通量测序结果显示。与正常组和LFS-01组相比,模型组的菌种数量和菌群多样性明显较低;主成分分析显示,LFS-01组与正常组离得更近,相似性更大;模型组与正常组和LFS-01组离得远,相似性较低。模型组与正常组相比:拟杆菌(门、目、属)(Bacteroidetes)、梭菌目(Clostridiales)细菌和脱硫弧菌目(Desulfovibrionales)细菌、乳杆菌属(Lactobacillus)、普雷沃氏菌属(Prevotellaceae-UCG-003)、毛螺菌属(Lachnospiraceae)等细菌明显减少,变形菌(门、目、属)、脱铁杆菌(门、目)、肠杆菌目(Enterobacteriales)、弯曲菌目(Campylobacterales),丹毒丝菌目(Erysipelotrichales)、伯克霍尔德氏菌目(Burkholderiales)、埃希-志贺氏杆菌属(Escherichia-Shigella)、螺杆菌属(Helicobacter)、Allobaculum、Terrisporobacter、Mucispirillum等细菌明显增加。说明模型组正常菌群减少而条件致病菌增加了,结肠炎会引起肠道菌群紊乱。LFS-01组与模型组相比拟杆菌(门、目、属)、乳酸杆菌(门、目、属)(Lactobacillales)、脱硫弧菌目、疣微菌目(Verrucomicrobiales)、普雷沃氏菌属、毛螺菌属等细菌明显增加,变形菌门(门、目、属)细菌和脱铁杆菌(门、目)细菌、肠杆菌(目、属)、弯曲菌(目、属)、丹毒丝菌目和伯克霍尔德氏菌目、埃希-志贺氏杆菌属、螺杆菌属、Allobaculum、Terrisporobacter、Mucispirillum等细菌明显减少。LFS-01组正常菌群增加了,而条件致病菌减少了。结论:1.LFS-01对DSS诱导的小鼠的结肠炎有明显缓解作用,对修复肠黏膜损伤,增强肠屏障功能也有明显作用。2.LFS-01能在一定程度上调整肠炎引起的菌群紊乱,增加肠道菌群多样性,特别是增加肠道正常菌群,减少条件致病菌。