【摘 要】
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目的:经尾静脉移植骨髓间质干细胞后,观察肝星状细胞活化及凋亡数量的变化情况,从体内调控肝星状细胞凋亡的角度出发,初步探讨骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的机制。
材料与方
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目的:经尾静脉移植骨髓间质干细胞后,观察肝星状细胞活化及凋亡数量的变化情况,从体内调控肝星状细胞凋亡的角度出发,初步探讨骨髓间质干细胞治疗肝纤维化的机制。
材料与方法:利用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离出大鼠骨髓间质干细胞,并于体外培养扩增。连续8周皮下注射CCl4诱导大鼠肝纤维化。将造模成功的20只大鼠随机分为实验组及对照组,每组10只;实验组按照1×106个细胞/kg经尾静脉注射骨髓间质干细胞,对照组经尾静脉注射1mlDMEM培养液。于移植前,移植后第3天,移植后第7天分别处死大鼠2、4、4只,取其肝脏进行羟脯氨酸的检测,病理切片行HE染色及massion染色检测肝纤维化变化情况;免疫组化检测α-SMA表达情况代表肝星状细胞的活化情况,α-SMA与TUNEL(原位末端转移酶标记技术)双染检测肝星状细胞的凋亡情况,比较实验组及对照组之间的差别。
结果:密度梯度离心结合贴壁筛选法能有效分离纯化大鼠MSC。CCl4皮下注射8周后,病理切片显示肝小叶结构破坏,肝细胞脂肪变性,间质纤维组织增生,有炎性细胞浸润,呈进展性肝纤维化的表现;羟脯氨酸含量明显升高,为0.2132±0.04μg/mg。MSC移植7天后,肝组织羟脯氨酸含量减少,为0.1270±0.0131μg/mg;病理显示肝内纤维组织沉积减少,肝细胞脂肪变性有所减轻,肝纤维化程度有所缓解,而对照组的肝纤维化程度继续加重,羟脯氨酸含量增加为0.2327±0.0513μg/mg。免疫组化显示,移植前及移植后第3天,α-SMA阳性细胞大量增生;移植后第7天,实验组的α-SMA阳性细胞数量有所减少,而对照组则继续上升;α-SMA+TUNEL双染显示,移植后第3天,实验组α-SMA阳性细胞的凋亡数量明显较对照组增加。
结论:密度梯度离心结合贴壁筛选法能有效分离纯化大鼠骨髓间质干细胞。骨髓间质干细胞移植有治疗肝纤维化的作用。骨髓间质干细胞移植后,肝星状细胞的凋亡增加,骨髓间质干细胞诱导肝星状细胞凋亡可能是其治疗肝纤维化的主要机制之一。
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