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目的:复肝方是治疗肝纤维化的中医经验方剂,本研究对复肝方提取物的化学成分和入血成分进行定性和定量分析,以阐明复肝方多成分在大鼠体内的药动学规律,为揭示复肝方的药效物质基础提供依据。
方法:(1)采用液相色谱-高分辨质谱对复肝方提取物中成分进行系统地定性分析;(2)建立液质联用法(LC-MS)同时测定复肝方提取物中11种成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、龙胆苦苷、当药苷、阿魏酸、羟基红花色素A、对香豆酸、芒柄花素、毛蕊异黄酮和黄芪皂苷Ⅰ)含量的方法,并测定提取物中11种成分的含量;(3)大鼠灌服复肝方(20g/kg)后的血浆采用液相色谱-高分辨质谱全扫模式监测,对入血成分进行定性分析;(4)建立液质联用法(LC-ESI-MS/MS)同时测定大鼠血浆中8种成分浓度(龙胆苦苷、当药苷、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、阿魏酸、对香豆酸、芒柄花素和原儿茶酸)的分析方法;大鼠灌胃给予复肝方6g/kg,应用建立的方法测定血浆8种成分浓度的经时变化过程,计算相应药动学药代参数。
结果:(1)共鉴定出复肝方提取物中53种化学成分;(2)提取物含量测定方法学考察符合样品测定要求,并成功应用于提取物中11种成分的含量测定,提取物中龙胆苦苷的含量最高;(3)大鼠经口给予复肝方后26种成分被吸收入血,包括15种原型成分和11代谢物,代谢物主要为硫酸和葡萄糖醛酸结合产物;(4)建立的LC-MS/MS定量分析方法可靠、准确、灵敏,符合生物样品测定要求,并成功应用于复肝方多成分在大鼠体内的药动学研究,8种成分浓度-时间曲线表明:龙胆苦苷、当药苷和对香豆酸在血浆中浓度最高:各成分半衰期差别较大,对香豆酸半衰期为1.67±0.31小时,而龙胆苦苷半衰期为13.97±6.32小时。
结论:阐明了复肝方具有的多种成分及其含量,揭示了该方多成分在大鼠体内的药动学规律。