牛结核病(bovine tuberculosis)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种以呼吸道病变为主的慢性进行性传染病。MPB83蛋白是牛分枝杆菌培养早期分泌到上清中的一种分泌性脂蛋白，在牛分枝杆菌中高水平表达，具有良好的免疫原性和免疫保护性。为观察重组MPB83蛋白的免疫活性，揭示该蛋白在牛结核病的诊断和防治中的作用，本研究利用PCR技术扩增了牛分枝杆菌MPB83基因，利用分子克隆技术实现了MPB83蛋白在大肠杆菌中的表达，并对重组蛋白进行了纯化和免疫印迹分析，为进一步研究其在牛结核病诊断中的应用提供了实验依据。 首先，本实验参照Gerd3ank中发表的牛分枝杆菌AF2122/97株MPB83基因序列，设计合成一对带酶切位点的引物，对MPB83基因进行PCR扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳分析，呈现一条约600bp的特异性条带，将其回收后克隆到pGEM-T Easy载体中，构建出克隆载体pGEM-MPB83，经测序鉴定后，将目的基因亚克隆至表达载体pET-30a中，得到阳性重组表达质粒pET30a-MPB83。 将重组质粒pET30a-MPB83转化表达宿主菌BL21(DE3)，经浓度为1mmol/L的IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表明，该融合蛋白以包涵体的形式表达，其分子量约为26kDa，蛋白表达量约占菌体总蛋白的20％，从而实现了MPB83重组蛋白在大肠杆菌中的高效表达。Western-Blot检测表明，表达的融合蛋白可被牛分枝杆菌阳性血清所识别，具有特异的免疫反应性。 本实验利用电泳分离、割胶回收的方法对重组MPB83蛋白进行了纯化。SDS-PAGE分析表明，纯化后的蛋白其纯度可达95％以上，本研究为建立高通量的牛结核病检测技术莫定了基础。