Pde4d是小鼠13号染色体上第一个被发现的印记基因,是在E9.5天的全胚胎中偏好父本表达,而在E15.5天主要脏器是双等位表达的不完全印记基因,许多研究已经表明Pde4d在多种疾病和肿瘤的发生过程中都发挥着重要的作用。Pde4d编码的蛋白是磷酸二酯酶超家族(Phosphodiesterase,PDE)的成员之一,因其可以专一水解细胞内第二信使环腺苷酸(cAMP)而备受关注。利用生物信息学分析Pde4d基因座,发现该基因由17个外显子构成,在其第七个内含子中存在着一个CpG岛(CGI96),第八个内含子存在一个miRNA(miR-1904),DNA甲基化和非编码RNA是非常重要的表观遗传修饰种类,对机体发育和疾病的发生都非常重要。miR-1904仅在小鼠中被发现,是一种内含子microRNA,这种“内含子miRNA-宿主基因”的形式往往具有重要的生物学意义,因此我们对miR-1904与Pde4d之间的调控关系进行研究。首先我们利用双荧光素报告系统在Hepa1-6细胞中验证miR-1904与Pde4d的靶向关系,随后通过在Hepa1-6细胞中转染miR-1904 mimics和miR-1904 inhibitor改变内源mi R-1904的表达水平,再通过qRT-PCR和Western Blot检测Pde4d的表达水平。发现miR-1904表达升高导致Pde4d在mRNA和蛋白水平下调,反之亦然。这些结果表明miR-1904能够调控其主基因Pde4d的表达。CGI96位于Pde4d的第七个内含子中,紧邻miR-1904上游,本研究首先检测了CGI96在正常肝脏组织和Hepa1-6细胞中的甲基化状态,然后又通过CRISPR/Cas9基因编辑技术将CGI96在细胞基因组水平上敲除,随后检测miR-1904和Pde4d的表达水平。结果表明,在Hepa1-6细胞中敲除CGI96后,miR-1904和Pde4d的表达水平都有一定程度的降低,表明CGI96对于Pde4d和miR-1904的表达都存在调控作用。综上所述,Pde4d内含子内的CGI96和miR-1904对于Pde4d表达具有调控作用,本研究旨在探究它们三者之间的调控关系,为表观遗传调控提供更多的研究数据。