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背景：膀胱癌（bladder cancer，BC）在世界范围内的发病率居恶性肿瘤的第四位，每年都有大量的新发病例，其中男性新发病例人数约为女性的3倍。而在我国，膀胱癌发病率居泌尿系统恶性肿瘤首位，其中90%以上为膀胱移行细胞癌（bladder transitional cell carcinoma，BTCC），具有较高的复发率和侵袭能力，多以浸润方式生长，近几年膀胱癌的发病率和死亡率均呈明显上升趋势。膀胱癌是一个多因素、多阶段、多基因参与的复杂疾病。越来越多的研究表明，环境暴露因素和遗传因素对膀胱癌的发生发展以及复发预后均起着至关重要的作用，同时，早期诊断和治疗可明显提高膀胱癌患者的生存率。MicroRNAs（miRNAs，微小RNA）是一类在病毒、植物和动物等生物体中广泛存在的进化上保守的内源性非编码蛋白质小RNA。大量研究资料表明，miRNAs参与了肿瘤细胞的生物调控过程，间接地起着原癌基因和抑癌基因的功能，在膀胱癌的发生和发展中扮演着重要的角色。因此，筛选合适的miRNAs作为膀胱癌的生物标志具有重要的临床意义。近几年来的研究均显示，miRNAs在组织和细胞中的表达表现为显著的肿瘤相关性、组织特异性和表达稳定性。而由于肿瘤标本的来源有限制，使得组织miRNAs在临床上的应用存在一定的局限性。但是，外周血标本的获得却十分简便，如果能在血液中检测出膀胱癌特异性表达的miRNAs，并将其作为膀胱癌的生物学标志，则对于早期诊断膀胱癌有至关重要的意义。目前已有大量文献报道在多数肿瘤患者的血浆中检测出表达异常的miRNAs，本研究拟在膀胱癌患者的血浆中检测出特异性表达的miRNAs，并将其作为诊断膀胱癌的生物学标志。方法：本研究中，使用TaqMan低密度芯片（TaqMan Low DensityArray，TLDA）检测分析了10对膀胱癌患者及与其匹配的正常对照人群血浆中miRNA表达谱，并且采用两阶段病例-对照研究设计进行验证，选择经病理组织学确诊的175例膀胱癌新发病例，同时选取未患肿瘤，并且与病例组不存在生物学关联的185例正常健康者作为对照，病例组与对照组的年龄和性别呈频数匹配。采用Real-time PCR的方法检测各个miRNA在血浆中的表达水平，并采用SPSS17.0进行ROC分析，评价表达有差异的miRNAs对膀胱癌的诊断价值。在此基础之上，在膀胱癌组织及相应的癌旁组织中验证miRNAs的表达水平，并通过生物信息学预测网站预测具有生物标志意义的miRNAs的靶基因。结果：按照CT值小于35， CT的绝对值大于5的标准，TLDA分析结果显示，膀胱癌血浆显著上调表达的miRNAs有3个（miR-505、miR-363、miR663b），显著下调的miRNAs有4个（miR-99a、miR-194、miR-100、miR-497），并且强行纳入文献中报道比较多的miR-1，在芯片分析中，miR-1在膀胱癌中表达显著下调。在内源性内参选择的实验中，发现miR-16在血浆中的表达较U6稳定，所以选择miR-16作为后期验证的内源性内参。在两阶段大样本验证中，均发现miR-497和miR-663b在膀胱癌病人血浆中有特异性表达，并且与膀胱癌的分级分期相关；ROC分析显示，合并miR-497和miR-663b对于临床上诊断膀胱癌具有一定的价值。同时，膀胱癌组织验证中显示，miR-497的表达趋势与血浆中表达一致，而miR-663b的表达趋势与血浆中相反。结论：miR-16可以作为膀胱癌血浆miRNAs检测的内源性内参；在膀胱癌患者血浆中，miR-497表达显著下调，而miR-663b表达显著上调，miR-497和miR-663b可以在血浆中区分膀胱癌患者和正常人群，可以作为有效诊断膀胱癌的循环miRNA生物标志应用于临床。