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目的:探讨Nesfatin-1/NUCB2在下丘脑-垂体-卵巢上的定位,分析Nesfatin-1/NUCB2 mRNA在初情期发育进程中大鼠下丘脑的表达丰度及与生殖激素相关基因的联系。研究外源性Nesfatin-1对初情期启动,促性腺激素、性腺激素的分泌及其基因表达的影响。从而探明Nesfatin-1/NUCB2及其mRNA的时空表达规律及其对大鼠初情期启动的影响与机制,为Nesfatin-1/NUCB2在生殖系统调控方面的进一步研究提供科学的理论依据。方法:(1)分离成年SD大鼠的下丘脑、垂体、卵巢和子宫,经4%多聚甲醛固定,制成石蜡切片,采用免疫组织化学方法观察Nesfatin-1的定位。(2)实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法分析Nesfatin-1/NUCB2 mRNA、Tac2 mRNA、GnRH mRNA在初情期发育进程中大鼠下丘脑的表达丰度,并分析其相关性。(3)采用2%的戊巴比妥钠对大鼠进行腹腔注射,麻醉后固定于大鼠脑立体定位仪,用50pmol Nesfatin-1对初情期前和成年雌性大鼠分别进行侧脑室注射,分别于15min和60min采血,取血清,酶联免疫分析法(enzyme-linked immunosorbent,ELISA)测血清促黄体素、促卵泡素浓度。(4)对初情期前(25d)雌性大鼠侧脑室注射Nesfatin-1,继续饲养至阴门开启时,断头取血并迅速取下丘脑、垂体、右侧卵巢,qRT-PCR分析FSHβ、LHβ、GnRH及其受体、ERαmRNA表达丰度。取左侧卵巢,称量湿重,常规石蜡切片、HE染色观察组织学变化。采用ELISA测血清中雌激素的浓度。结果:(1)Nesfatin-1/NUCB2主要分布于下丘脑弓状核、视上核、室旁核、下丘脑外侧区,腺垂体,卵母细胞、黄体细胞、间质细胞、颗粒细胞,子宫浆膜下层结缔组织,子宫肌层、子宫内膜和间皮细胞。(2)Nesfatin-1/NUCB2 mRNA在大鼠下丘脑中均有表达,但其表达水平随发育时期的变化而变化,与Tac2mRNA呈正相关(r=0.940,P<0.001),到初情期前时表达水平最高,与其它阶段差异显著(P<0.01)。(3)在初情期前的雌性大鼠中,侧脑室注射Nesfatin-1后15和60 min均能提高血清LH水平,15 min时提高更明显(P<0.05);但Nesfatin-1对FSH水平的影响在15 min时增加(P<0.05),60 min不产生影响(P>0.05)。在成年的雌性大鼠中,Nesfatin-1对LH和FSH的分泌不产生影响(P>0.05)。(4)侧脑室注射Nesfatin-1促进初情期的启动,显著增加卵巢重量和增强雌激素的分泌(P<0.05)。光镜下观察Nesfatin-1试验组卵巢可见多个大的黄体结构。侧脑室注射Nesfatin-1显著增强GnRH、GnRHR、LHβ、LHR、FSHβ、ERαmRNA的表达(P<0.05),而不影响FSHR mRNA的表达。结论:(1)Nesfatin-1广泛分布于大鼠下丘脑、垂体、卵巢和子宫;(2)Nesfatin-1/NUCB2 mRNA随发育时期的变化而改变,在初情期前表达水平最高,且与Tac2 mRNA呈正相关;(3)Nesfatin-1可在中枢水平作用于腺垂体,促进初情期前的大鼠FSH和LH的分泌,但对成年大鼠无影响;(4)Nesfatin-1促进大鼠初情期的启动以及生殖轴GnRH、GnRHR、LHβ、LHR、FSHβ、ERαmRNA的表达。