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背景和目的:多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin Lymphoma,NHL)均为一类主要起源于B淋巴细胞的血液系统恶性肿瘤,与其他造血系统恶性肿瘤一样,放化疗仍是目前临床上治疗这一类病症的首选方法。尽管多数病患在完成正规疗程后能取得一定效果,达到疾病稳定或者缓解,但也有部分患者始终对药物不敏感,或短期内病情进展、复发。造血干细胞移植术(Hematopoietic Stem Cell Transplantation,HSCT)作为治愈血液疾病的一种可能,由于其较严格的适应性、获得供体的难度和较高的手术代价,无法在临床普遍应用。因此,对骨髓瘤和淋巴瘤等恶性血液疾病治疗的方法还需进一步探索研究。目前,以嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor-T Cell,CAR-T)为代表的免疫细胞治疗技术是恶性肿瘤治疗领域最有前景的手段。其中,CAR-T细胞已在复发难治的B细胞来源的急性淋巴细胞白血病和淋巴瘤,以及骨髓瘤的治疗上取得了很好的疗效,但仍存在细胞因子释放综合征等严重的毒副反应,部分患者缓解后短时间内可能再次复发。国外的临床试验和我们的临床研究已初步证实,靶向肿瘤相关抗原特异性T淋巴细胞(Tumor-associated Antigen-specific Cytotoxic T lymphocytes,TAA-CTL)对于预防急性髓细胞白血病、淋巴瘤和多种实体肿瘤的复发,以及复发难治患者的治疗上有一定的疗效,并具有很好的安全性。本研究将通过采集患者外周血,在体外通过抗原提呈细胞介导,培养特异性T淋巴细胞后回输患者体内,初步探讨TAA-CTL对多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤患者治疗的安全性和有效性。方法:本次研究纳入中高危并接受过至少一种方案治疗的MM、复发/难治或有高复发风险的NHL患者共9例,其中MM 4例,NHL 5例。分次抽取入组患者外周血,静置分层,使用含有多种肿瘤相关抗原(Tumor-associated Antigen,TAA)的混合多肽(MM组含NY-ESO-1,MAGE-A3,MAGE-A4,WT1,Survivin、PRAME,NHL组含NY-ESO-1,MAGE-A3,MAGE-A4,WT1,Survivin、PRAME、LMP1、LMP2A)刺激贴壁细胞,培养负载肿瘤抗原的树突状细胞(Dendritic Cell,DC),再将成熟的DC与不贴壁细胞以一定的效应比搭配,在细胞因子的刺激下,共同培养具有靶向肿瘤抗原特异性的细胞毒性T细胞(Cytotoxic T Lymphocytes,CTL)。收集一部分细胞制品,进行流式细胞学检测,测定表型,判断各淋巴细胞亚型的比例。把扩增后经检测确定无污染的细胞制品回输给患者,对完成细胞治疗的其中7名患者进行病情评估,并在每人回输前及回输后的一段时间内,以周为单位,提取外周血做酶联免疫斑点检测(Enzyme Linked Immunospot Assay,ELISpot),通过斑点形成细胞(Spot-Forming Cell,SFC)数的多少,评估T细胞分泌γ-干扰素的水平,反应外周血中T细胞增殖情况及其活性。结果:(1)9名患者中的1名在采血后主动要求退出研究,还有1名在第一次细胞回输前出现疾病进展,退出临床试验,余下7例患者各接受了1-4次TAA-CTL的回输,所有患者在回输后均未出现明显不良反应;3例MM患者中1例部分缓解的患者第一次回输后即达到完全缓解(Complete Remission,CR),另2例活动期患者治疗后都处于疾病稳定状态(Stable Disease,SD)。4例NHL患者中2例对治疗无反应,病情持续进展,短期内死于感染,1例经PET-CT检查提示多发病灶消失,结合临床达到完全缓解,持续19个月,另有1例高复发风险的缓解期患者,使用细胞治疗预防复发,11个月后复发。(2)通过对各患者细胞制品的表型检测发现,82.98%(50%-99.71%)为CD3+T细胞,这其中CD4+T细胞含量最高,为42.09%(7.21%-90.28%),另有25.32%(2.22%-71%)的CD8+T细胞。其余还有少量NK细胞(CD3-CD56+,13.99%,0.95%-46.01%),比例最低的是B细胞(CD19+),只有极少量的0.76%(0.07%-1.92%)。在这些T细胞中,由以表达CD45RO+CD62L-CCR7-的效应记忆性T细胞最多,占总数的70%(38.74%-96.96%),其余是17.19%的初始性T细胞(0.47%-41%)和少量中央记忆性T细胞(2.58%,0.02%-12.0%)。(3)ELISpot检测提示,多数完成细胞回输的患者,其血液中斑点形成细胞(SFC)数的水平随时间呈现一个先升高后回落的变化,而数量的峰值基本都出现在输注后的2或3周时,仅1名患者在后续的检测中一直无显著的升高。结论:(1)成功在体外培养了负载靶向肿瘤相关抗原的免疫细胞并回输人体,回输后所有患者均无明显不良反应,具有良好的耐受,提示其安全性较好。(2)初步证明了TAA-CTL对MM和NHL治疗的有效性,为改善患者的疾病预后、延长生存期提供了新的方案。(3)因本研究入组病例数较少,是否具有足够的临床应用价值还需要更大样本量的临床试验来证明。