【摘 要】
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转基因植物研究及其产业化的飞速发展对其检测方法提出了更高的要求,将电化学生物传感技术与分子生物学技术相结合,针对转基因植物外源基因序列片段进行检测,可建立一种检测转基因植物产品的新方法。量子点作为一种新型的纳米材料,在生物研究领域中具有明显的优势。随着对量子点研究的深入及其应用范围的扩大,量子点在生物化学、细胞生物学、免疫生物学等学科的研究中显示了巨大的发展潜力,特别是量子点作为标记物用于生物体系
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转基因植物研究及其产业化的飞速发展对其检测方法提出了更高的要求,将电化学生物传感技术与分子生物学技术相结合,针对转基因植物外源基因序列片段进行检测,可建立一种检测转基因植物产品的新方法。量子点作为一种新型的纳米材料,在生物研究领域中具有明显的优势。随着对量子点研究的深入及其应用范围的扩大,量子点在生物化学、细胞生物学、免疫生物学等学科的研究中显示了巨大的发展潜力,特别是量子点作为标记物用于生物体系,已成为目前最有前途的应用领域。本论文主要包括以下内容:将量子点作为寡聚核苷酸探针的标记物,用于转基因植物外源基因序列片段的检测。在水相中合成了表面经巯基乙酸修饰的CdS和PbS量子点,在活化剂作用下,量子点表面的羧基可与DNA探针一端修饰的氨基作用,完成量子点对探针序列的标记,利用透射电镜及紫外可见吸收光谱对量子点标记探针进行了表征;将目标序列通过共价键合的方式固定在金电极表面或者通过干燥吸附的方式直接固定在微孔板表面,并利用电化学阻抗技术对不同修饰过程中的金电极进行了表征;在一定条件下使量子点标记ssDNA探针与固定化的目标ssDNA序列杂交,利用硝酸溶解固定在杂交产物上的量子点,以玻碳电极为工作电极,以同位镀汞阳极溶出伏安法检测溶解产生的金属离子的溶出信号,从而间接完成对目标ssDNA序列的电化学检测。利用量子点标记电化学杂交分析方法对转基因植物外源基因序列片段(CaMV 35S、NOS、PAT、FMV 35S)进行了检测。结果表明,本实验方法对特定序列的检测有较高的灵敏度和选择性,可以较好的识别与目标序列相关的三碱基错配序列和非互补序列。另外,利用两种不同量子点标记不同的探针与固定化的目标序列同时进行杂交反应,利用杂交反应特异性识别互补序列,相应量子点标记物的电化学信号不同。
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