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肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)是一类泛嗜性沙门氏菌,其不仅是危害养禽业发展最为严重的病原之一,而且经常以污染的家禽产品为载体危害人类健康。由fliC基因编码的鞭毛蛋白是沙门氏菌重要的保护性抗原之一,可引起机体强烈的免疫应答反应。研究Fli C蛋白的优势抗原区对沙门氏菌新型疫苗的研发,进而减少人类食源性肠炎沙门氏菌的感染具有重要意义。本研究利用DNaseⅠ将SE的fliC基因随机酶切成100-500 bp的DNA小片段,将这些片段插入到酵母表面展示载体pCTCON-2中,并将其转入大肠杆菌中构建酵母随机展示文库pCTCON-fliC-Lib,其库容量大小约为2.7×105。通过基因测序确定文库p CTCON-fliC-Lib的随机性和插入片段的大小,结果显示随机挑取的50个克隆中的所有片段插入方向都是随机的,这些片段的大小在100-500 bp范围内,其分布能够覆盖整个fliC基因。将酵母展示文库pCTCON-fliC-Lib电击转入酿酒酵母EBY-100菌株中诱导表达。用SM6阳性血清染诱导表达的FliC文库p CTCON-fliC-Lib,通过流式细胞仪分选阳性酵母,经两轮分选后,提取阳性酵母的质粒进行基因测序分析。结果显示SM6的FliC蛋白的抗原区位于D1区(1-201位氨基酸)、D2区(202-352位氨基酸)和D4区(394-505位氨基酸),非抗原区位于D3区(353-393位氨基酸)。将Fli C蛋白的4个区域进行酵母表面展示表达并通过流式分析4个区域的抗原特性;同时4个区域进行原核表达并通过ELISA分析其抗原特性。流式分析和ELISA分析结果显示Fli C蛋白的4个区域中,D1区和D2区为主抗原区,D4区为次抗原区,D3区为非抗原区。通过鸡群免疫FliC蛋白的各个抗原区分析各抗原区在鸡体内的功能,结果表明FliC蛋白的D1区、D2区、D4区均能降低SM6在鸡体内的定植。本研究利用酵母表面展示技术将构建的肠炎沙门氏菌SM6菌株的Fli C蛋白抗原文库展示于酵母表面,筛选并鉴定了Fli C蛋白的主抗原区,为抗肠炎沙门氏菌新型疫苗的研发提供理论基础。