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本试验以螺旋藻多糖与银杏叶有效成分——银杏黄酮、银杏内酯为材料,对螺旋藻多糖与银杏黄酮、银杏内酯以不同剂量和不同配比,在抗氧化抗衰老方面进行了研究,获得如下研究成果:
1、复合螺旋藻多糖对D-半乳糖致衰老小鼠抑制作用研究
采用每天颈背皮下注射D-半乳糖125mg·kg-1·d-1造小鼠衰老模型。
高剂量(200mg·kg-1·d-1)、中剂量(100mg·kg-1·d-1)、低剂量(50mg·kg-1·d-1)螺旋藻多糖与银杏叶有效成分(总黄酮含量≥24%、银杏内酯含量≥6%)按1∶1、1∶2和2∶1的比例复合分别灌服小鼠,为期42d,检测免疫器官重量、血清SOD酶活性扣心肌、脑MDA含量等相关衰老指标。
高剂量螺旋藻多糖:银杏叶有效成分=1∶2时,胸腺指数达到最大,比模型组提高37.19%(P<0.01); PSP∶GBE=1∶1时,脾指数达到最大,比模型对照组提高12.11%;PSP∶GBE=2∶1时,小鼠血清SOD活力最高,比模型对照组提高38.78%(P<0.01)。PSP∶GBE=2∶1时,心肌和脑MDA含量最低,表明该配比下药物发挥最大的协同增效作用,抑制效果最好。
中剂量螺旋藻多糖:银杏叶有效成分=1∶2时,胸腺指数达到最大,比模型组提高32.64%(P<0.01);PSP∶GBE=1∶1时,脾指数达到最大;PSP∶GBE=2∶1时,小鼠血清SOD活力最高,比模型对照组提高29.01%(P<0.01)。从心肌MDA含量来看,复合组PSP∶GBE=2∶1时,药物发挥最大的协同增效作用,抑制效果最好;从脑MDA含量来看,PSP∶GBE=2∶1时,与模型组对照,降低比例达到23.53%(P<0.01)。
低剂量螺旋藻多糖∶银杏叶有效成分=1∶2时,胸腺指数最大,比模型组提高23.56%(P<0.01); PSP∶GBE=2∶1时,脾指数最大,比模型对照组提高7.24%(P<0.01);PSP∶GBE=1∶1时,小鼠血清SOD活力最高。从心肌和脑MDA含量来看,PSP∶GBE=2∶1时最低,表明该剂量该配比下的药效最好。
2、复合螺旋藻多糖体外抗氧化作用研究
采用邻苯三酚自氧化法、Feton反应产生OH-和H2O2清除试验,检测螺旋藻多糖与银杏叶有效成分按1∶1、1∶2和2∶1的比例复合对上述自由基离子的清除率。H2O2清除率试验结果表明,在浓度达到0.8mg/mL时,其清除率均比相应的单一组高,其中清除率最高的是PSP∶GBE=2∶1组,在浓度为1.2mg/mL时清除率达到87.4%。超氧阴离子清除试验结果表明,PSP∶GBE=1∶2组的变动幅度最大,并且在最终浓度达到0.5mg/mL时,其清除率所有组中最高,达到72.3%。羟自由基的产生及清除活性测定结果表明,PSP∶GBE=2∶1时,清除率最大。
3、复合螺旋藻多糖对果蝇寿命试验研究
将24h内羽化的果蝇分组,按照1.00%、0.50%、0.25%浓度配制供试药物培养基,供试药物培养基螺旋藻多糖与银杏叶有效成分按1∶1、1∶2、2∶1三种比例复合,每天定时统计果蝇死亡情况,计算平均寿命和最高寿命。
复合螺旋藻多糖对果蝇平均寿命的影响,高剂量组意外对其表现出负抑制,中、低剂量PSP∶GBE=2∶1组分别比空白对照组平均寿命提高了5d和8d。与空白对照组相比,单一螺旋藻多糖组高、中、低剂量的最高寿命分别延长了9d,8d,5d,与剂量成正相关;而单一银杏内酯分别比空白对照组提高了4d,6d,8d,与剂量成负相关。
4、复合螺旋藻多糖对人乳腺癌231细胞和胃癌MGC细胞抑制作用研究
螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶有效成分(GBE)1∶1比例复合组、1∶2比例复合组和2∶1比例复合组对人乳腺癌231细胞的抑瘤率,高剂量时分别比空白对照组提高93.32%(P<0.01)、57.83%(P<0.01)和44.95%(P<0.01);中剂量时分别比空白对照组提高67.52%(P<0.01)、59.93%(P<0.01)和41.72%(P<0.01);低剂量时分别比空白对照组提高54.22%(P<0.01)、48.56%(P<0.01)和40.26%(P<0.01)。试验发现单一成分的螺旋藻多糖组对人乳腺癌231细胞有较好的抑制作用,随着剂量的降低药效逐渐降低。复合螺旋藻多糖对人乳腺癌231细胞的抑制作用,高剂量组1∶1时抑制效果最好,抑制率达到93.32%。表明复合螺旋藻多糖在该剂量配比时协同增效作用达到最大。
螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶有效成分(GBE)1∶1比例复合组、1∶2比例复合组和2∶1比例复合组对人胃癌MGC细胞的抑制率,高剂量时分别比空白对照组提高92.44%(P<0.01)、26.36%(P<0.01)和71.32%(P<0.01);中剂量时分别比空白对照组提高62.37%(P<0.01)、20.57%(P<0.01)和24.15%(P<0.01);低剂量时分别比空白对照组提高27.94%(P<0.01)、30.36%(P<0.01)和17.92%(P<0.01)。试验发现单一成分的螺旋藻多糖组对人胃癌MGC细胞也有较好的抑制作用,并呈剂量依赖性。高、中剂量复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用,1∶1比例配比时抑制效果最好。其中高剂量组1∶1配比时抑制率达到92.4%。表明复合螺旋藻多糖在该剂量配比时协同增效作用最大。
5、高剂量复合螺旋藻多糖对小鼠S180肉瘤抑制作用研究
高剂量(200 mg·kg-1·d-1)螺旋藻多糖与银杏叶有效成分按1∶1、2∶1和1∶2的比例复合。分别给接种S180肉瘤的荷瘤小鼠灌服此三种复合制剂和螺旋藻多糖、银杏黄酮、银杏内酯三种单一成分,观察对小鼠S180肉瘤的抑制作用。螺旋藻多糖与银杏叶有效成分1∶1比例复合组、2∶1比例复合组和1∶2比例复合组的抑瘤率分别比空白对照组提高63.774%(P<0.01)、46.883%(P<0.01)和40.282%(P<0.01);单一成分螺旋藻多糖组、银杏黄酮组和银杏内酯组的抑瘤率分别比空白对照组提高30.728%(P<0.05)、34.112%(P<0.05)和51.220%(P<0.01)。与空白对照组相比,试验组小鼠的脾指数、胸腺指数和外周血白细胞数都无显著差异(P>0.05)。高剂量螺旋藻多糖与银杏叶有效成分复合使用,对抑制小鼠S180肉瘤能产生协同增效作用,且对小鼠未见免疫损伤。