肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，肿瘤抑制基因的失活是肝癌发病的关键因素。在肿瘤发生过程中，肿瘤抑制基因频频缺失，表现为染色体的杂合性缺失（loss of heterozygosity, LOH）。PCR微卫星标记分析和比较基因组杂交等杂合性缺失分析表明人染色体8p23区域在肝细胞癌中的LOH频率最高。我们利用定位候选克隆策略，克隆获得了一个新的定位于8p23区域的肝相关候选肿瘤抑制基因LPTS（GenBank登录号：AF205718）。经大规模对临床肝癌和癌旁样品，以及肝癌细胞株的RT-PCR和Northern Blotting杂交检测，发现LPTS基因在正常肝组织和细胞中都有表达，而在肝癌组织中的表达明显下调或检测不到，LPTS基因可能参与了细胞增殖的调控。实验结果显示，转染LPTS基因进入肝癌细胞株SMMC-7721强制外源LPTS的表达，可抑制肝癌细胞的集落形成。利用反义核酸技术降低在正常肝细胞L02中LPTS基因的表达，可大大刺激细胞的生长，而对照寡聚核苷酸没有这种效应。实验证明LPTS基因在肝癌组织中的表达缺失频率与LOH 检测频率一致，并可抑制细胞的生长和集落形成，很可能是一个肿瘤抑制基因。（以上工作发表在HEPATOLOGY 2000, Vol. 32, pp721-727） 对LPTS基因的基因组结构和表达的研究发现LPTS基因组序列共含有7个外显子，在肝和肝癌，以及其它组织来源的肿瘤细胞中含有两个转录本， i <WP=3>LPTS-S和LPTS-L，且这两个转录本没有明显的组织特异性分布。LPTS-S缺失第6号外显子，并造成读码框的改变，编码一个由174个氨基酸组成的蛋白；而LPTS-L含有全部7个外显子，编码蛋白长328个氨基酸。两个蛋白享有一个相同的132个氨基酸长的N端序列，都可以抑制肝癌细胞的克隆形成。通过对酵母、线虫、果蝇和小鼠的LPTS蛋白的种系进化分析表明，LPTS在各物种之间均有较高的序列同源性，LPTS在种系进化中的高度的保守性也说明LPTS是一个重要的功能基因。 利用GST-LPTS融合表达系统在E.coli中表达LPTS融合蛋白，制备抗体，Western杂交和免疫组织化学实验检测LPTS的表达。实验结果证明LPTS基因在蛋白水平的表达差异十分明显，即在正常肝组织中有表达，而在肝癌组织中缺失表达。利用绿色荧光蛋白荧光标记和免疫荧光技术检测LPTS的亚细胞定位，实验结果表明LPTS基因的表达产物中，LPTS-L蛋白局限于核仁中表达，且其核仁定位序列是位于蛋白的羧基端；而LPTS-S蛋白在细胞核和细胞质中都有表达，在细胞核中的分布相对较高。 对LPTS的功能研究表明，LPTS能抑制肝癌细胞的生长，并引起死亡。将LPTS基因转染SMMC-7721细胞筛选稳定表达株，LPTS基因的表达使肝癌细胞膨胀变大，变圆，进而死亡，表现出危机期细胞的典型特点。对LPTS功能的进一步研究发现，LPTS-S和LPTS-L蛋白可以抑制端粒酶的活性。利用大肠杆菌表达GST-LPTS融合蛋白，体外检测其对端粒酶活性的影响，结果表明LPTS-S、LPTS-L蛋白都可以抑制SMMC-7721肝癌细胞和293T胎肾细胞的端粒酶活性；测定转染LPTS基因的SMMC-7721稳定转染细胞株，发现LPTS基因的表达同样可以强烈地抑制端粒酶活性。体外和体内实验都表明，LPTS是蛋白类的端粒酶抑制剂，其中LPTS-L的端粒酶抑制活性非常强，活性区域位于该蛋白的C端。 利用SSCP技术和PCR产物直接测序等方法在70株肿瘤细胞（56株肝癌细胞株，7株卵巢癌细胞株和7株头颈癌细胞株）和70对肝癌、癌旁组织样品 ii<WP=4>中检测LPTS基因中的点突变。发现LPTS基因内存在5种点突变，集中在第2号，5号和7号外显子内。其中第7号外显子内的880位的A→T的点突变有10％的突变频率，使编码的丝氨酸突变成半胱氨酸。我们将该突变基因，以GST融合形式在大肠杆菌中表达，检测突变的LPTS蛋白抑制端粒酶的活性，发现该点突变对蛋白的端粒酶抑制功能没有影响。因此造成LPTS基因在肿瘤细胞中的失活可能与甲基化、乙酰化等遗传外调控机制（epigenetic）有关。 LPTS基因表达产物在正常肝和肝癌组织中具有明显的差异表达，是一个强有力的端粒酶抑制剂，对肝癌的临床诊断和基因治疗具有良好的应用前景。有关LPTS的应用已经申请了发明专利（00 1 15395.1）。目前对LPTS基因的功能、作用机理和调控正在进行深入的研究。