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Ⅰ型干扰素(IFN)是由病原感染细胞后分泌的多肽,具有抗病毒、抗细菌和抗肿瘤的活性,同时还能促进免疫应答调节。因此,了解发病中华鲟(Acipenser sinensis)中高表达的IFNes的功能有利于加强中华鲟的保护,并且有助于加深对免疫进化机理的认识。在本研究中我们通过体外重组中华鲟IFNe2蛋白,并对其功能进行了初步的研究。本试验将去除信号肽的中华鲟IFNe2编码区序列克隆进入pET-32a原核表达载体,发现中华鲟IFNe2在大肠杆菌中主要以可溶性蛋白的形式表达,通过镍亲和层析可以得到较纯的重组IFNe2蛋白。为了后续更好地对IFNe2的功能进行研究,我们将位于中华鲟干扰素调节因子(IRF)3及IRF7 DBD(DNA-binding domain)结构域与IAD(IRF association domain)结构域之间的序列克隆到pET-32a载体中,发现IRF3和IRF7也都能以可溶性蛋白的形式表达,并且可以得到较纯的蛋白用于多克隆抗体制备。在4次免疫小鼠之后,获得了较高效价的IRF3和IRF7多克隆抗体,其中IRF3抗体滴度超过1:729000,IRF7抗体滴度超过1:81000,此外,通过Western Blot检测IRF3和IRF7多克隆抗体的特异性发现两个多克隆抗体都具备较强的特异性。在中华鲟中,过去的报道已经研究了IFNe2时空表达规律,但其生物学功能尚不清晰。本试验检测了IFNe2的抗病毒作用,并且研究了IFNe2对IFN信号通路的影响。结果显示,添加终浓度为1μg/mL重组中华鲟IFNe2蛋白能够诱导EPC(epithelioma papulosum cyprini)细胞中Mx、PKR和Viperin的表达而激活EPC细胞的抗病毒活性,并且可以降低EPC细胞中SVCV(spring viraemia of carp virus)病毒G蛋白、N蛋白和P蛋白的表达,减少病变效应的产生,这一结果说明中华鲟IFNe2具备抗病毒活性。重组中华鲟IFNe2蛋白还能影响IFN信号通路上基因的表达。通过在中华鲟鳍细胞系中加入1μg/mL的重组IFNe2蛋白可以诱导Mx、PKR、Viperin和ADAR4等干扰素刺激基因的表达,尤其是极显著地上调了Mx和Viperin的表达,但是重组IFNe2不能诱导ADAR1-1和ADAR1-2的表达,此外,重组IFNe2可以诱导IRFs的表达,在诱导后3 h和6 h时显著上调IRF1和IRF2的表达,并持续上调IRF3和IRF7的表达至24 h,且诱导IRF7发生磷酸化。在加入1μg/mL的重组IFNe2蛋白刺激中华鲟鳍细胞系后,细胞中IFNe1和IFNe3的表达都在3 h时出现显著上调,并且随后就恢复到正常水平,同时IFNe2还能诱导其自身的表达,在6 h时先出现下调,随后在12 h时出现极其显著的上调表达。这些结果说明IFNe2可能通过诱导IRF7发生磷酸化而扩大IFN的免疫应答。IRF是病毒和细菌诱导IFN信号通路的转录介质,在多种细胞过程中起着重要作用,例如抵抗病毒入侵,促进细胞生长和凋亡等。IRF对IFN的转录起着至关重要的作用,为了了解中华鲟IRF对IFNe2转录的调控,本文以长江鲟(Acipenser dabryanus)为研究对象研究了IRF1、IRF3、IRF4、IRF5和IRF8的结构及表达模式。除了IRF1外,所有IRF由8个外显子和7个内含子组成。此外,在预测的蛋白质序列中,DBD结构域与斑点雀鳝(Lepisosteus oculatus)具有最高的一致性。关于表达模式,发现五种IRF基因在所有检测的组织中组成型表达,并且在血液,肾,肠和脾中具有更高的表达。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后,IRF1和IRF3的表达在脾脏和中肾中上调,而IRF5和IRF8基因在中肾中均下调。此外,感染3 h后IRF4在脾和中肾中被嗜水气单胞菌显着上调。这些结果表明长江鲟IRF1、IRF3和IRF4可能对依赖于细菌诱导的IFN的转录起着重要的作用。