【摘 要】
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本研究采用混合酸酐法制备莱克多巴胺(Ractopamine，RCT)免疫抗原和沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)免疫抗原，经鉴定RCT免疫抗原(RCT-BSA)的偶联比率为25.8∶1，包被抗原(RCT-OA)的偶联比率为48.41∶1，SAL免疫抗原(SAL-BSA)的偶联比率为12.8∶1，包被抗原(SAL-OA)的偶联比率为18.7∶1。采用重氮化法制备克伦特罗(Clenbuterol
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本研究采用混合酸酐法制备莱克多巴胺(Ractopamine，RCT)免疫抗原和沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)免疫抗原，经鉴定RCT免疫抗原(RCT-BSA)的偶联比率为25.8∶1，包被抗原(RCT-OA)的偶联比率为48.41∶1，SAL免疫抗原(SAL-BSA)的偶联比率为12.8∶1，包被抗原(SAL-OA)的偶联比率为18.7∶1。采用重氮化法制备克伦特罗(Clenbuterol，CL)免疫抗原，CL免疫抗原(CL-BSA)的偶联比率为24.21∶1，包被抗原(CL-OA)的偶联比率为13.63∶1。
利用制备好的抗原免疫家兔，获得抗RCT抗血清，抗CL抗血清，抗SAL抗血清，以制备相应的多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附检测法(ELISA)对抗血清效价进行了检测，抗RCT抗血清，抗CL抗血清，抗SAL抗血清最高效价分别为1∶32000，1∶16000，1∶16000。经鉴定三种抗血清的特异性较高和与各自抗原同系物的交叉反应率也很低。在优化包被抗原浓度，封闭条件，抗体和酶标二抗的浓度，显色时间等条件的基础上，采用间接竞争ELISA法建立检测RCT，CL，SAL的标准曲线，三者分别在0.55ng/mL-1.21μg/mL、2.71ng/mL-0.66μg/mL、1.48ng/mL-3.24μg/mL浓度范围之间，呈良好的线性相关，RCT、CL、SAL的最小检测极限0.55ng/mL、2.71ng/mL、1.48ng/mL。将各抗原以1，10，100ng/g的浓度添加时，猪肉组织，猪尿液中的回收率在78.33％-119％范围内。在间接竞争ELISA方法的基础上，制备了RCT，CL，SAL间接竞争酶联免疫吸附检测技术，可用于检测动物肌肉组织、尿液中RCT，CL，SAL的残留量。
为进一步降低检测限，在间接竞争ELISA的基础上，利用抗RCT抗体，抗CL抗体，抗SAL抗体制备免疫亲和层析柱(IAC)，先将样品中RCT，CL，SAL富集，再进行间接竞争ELISA检测，建立了检测RCT，CL，SAL留的亲和层析柱-酶联免疫吸附(IAC-ELISA)检测技术。经优化后IAC-ELISA方法的检测限可降低一个数量级，达0.01ng/g。
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