Gremlin在胆道闭锁患儿肝组织中的表达及意义的初步探索

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guoke3zhang
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目的:本研究通过检测骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)的内源性拮抗剂Gremlin在胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝组织中的表达水平,了解Gremlin与胆道闭锁肝纤维化之间的关系,并对其作用机制作一初步探索。方法:收集深圳市儿童医院从2019年3月至2019年9月期间住院患儿的术中肝脏组织标本,其中包括:胆道闭锁(BA)组:肝脏组织标本15例(男/女7/8),年龄范围为1个月-3个月,平均日龄为63.95±27.43天;胆管扩张症组(对照组):肝脏组织标本15例(男/女4/11),年龄范围为1个月-1岁2个月,平均日龄为321.60±125.38天。通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)的实验方法检测Gremlin在BA组与对照组的表达情况,并用蛋白质免疫印迹技术对BMP经典通路中的Smad1蛋白的表达进行检测。应用SPSS 24.0、Graphpad Prism8.0以及图像分析软件Image J对Gremlin、Smad1的表达进行图像及统计学分析,明确Gremlin在两组中转录水平和蛋白表达水平上的差异,探究Gremlin在BA肝纤维化过程中的作用机制。结果:(1)荧光定量PCR结果表明:Gremlin 1在胆管扩张症患儿肝组织中m RNA的表达量约为胆道闭锁患儿表达量的9.8倍,差异有统计学意义(P<0.01),即:与对照组(胆管扩张症,CC)相比,胆道闭锁样本中Gremlin1的表达量在转录水平上显著下调(P<0.01);(2)利用Western Blot检测样本中Gremlin的表达水平,GAPDH作为内参蛋白。结果表明:与对照组相比,BA样本中Gremlin1的表达量在蛋白表达水平显著下调(P<0.05),与荧光定量PCR结果相符;并且Gremlin2在BA组的表达也显著下调(P<0.05);(3)通过免疫蛋白印迹技术检测BMP通路中Smad1的表达,结果发现:在胆道闭锁肝组织中,Smad1的表达下调,但磷酸化水平不变(磷酸化比例上升),提示Gremlin可能通过BMP/Smad通路参与BA肝纤维化过程。结论:在胆道闭锁患儿肝组织中,Gremlin1和Gremlin2呈现低水平表达,提示Gremlin可能参与BA肝纤维化过程;另外,BMP通路中Smad1磷酸化比例升高,提示Gremlin可能通过BMP/Smad通路在胆道闭锁肝纤维化过程中起保护作用。
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