本文利用PEG介导的原生质体法将抗冷冻蛋白基因(afp)转入草菇菌丝原生质体中，通过0℃低温筛选，获得了无抗性标记的耐低温转基因草菇新菌株。 主要结果如下： (1)确定了草菇菌丝原生质体的释放和再生的最佳条件。草菇菌丝原生质体释放的最佳条件为：以液体培养3天的草菇菌丝为材料，以0.6 mol/L甘露醇为原生质体释放稳渗剂配制2％酶液，35℃酶解2.5 h，原生质体最高得率为1.03×10<8>；草菇原生质体的最佳再生条件为：PDA培养基+0.8 mol/L甘露醇，最高再生率为0.3％。 (2)确定了草菇菌株V844菌丝在含潮霉素的PDA固体培养基上的最低抑制浓度为50μg/mL，在含潮霉素的PDA液体培养基中的最低抑制浓度为45μg/mL。 (3)确定了草菇菌株V844在0℃低温的致死时间为12h，V844原生质体再生菌丝在0℃低温的致死时间为72h。 (4)利用表达质粒pAN7-1和表达质粒pAg-afp共转化草菇菌丝原生质体，经过含潮霉素的筛选培养基共筛选，结果没有筛选到转化子。 (5)利用表达质粒pAg-afp和pLg-afp分别单转化进草菇菌丝原生质体中，经过0℃低温筛选，获得了假定转化子，这些转化子经过PCR鉴定，Souther杂交验证，最终获得6个含afp基因的转基因草菇，而转化pAg-afp质粒的草菇原生质体没有筛到转化子。 (6)转基因草菇培养液抗冻蛋白活性的检测。检测结果表明：转基因草菇培养液具有明显的抗结冰效果，说明整合进草菇基因组的afp基因表达出了有活性的抗冷冻蛋白；而且转基因草菇不同的菌株之间表达的抗冷冻蛋白的量不同。 (7)通过对转化子菌丝与对照菌丝在PDA培养基上的平均生长速度进行方差分析表明，草菇转化子pTV-1和pTV-7与对照之间的平均生长速度存在显著差异。 草菇转化子的菌丝形态与对照相比发生了不同程度的变异，这可能是由于外源基因的进入改变了草菇的基因型，从而使得表型也发生了变化；而对转化子菌丝与对照菌丝在棉籽壳培养基上的平均生长速度进行方差分析表明，草菇转化子与对照之间的平均生长速度不存在显著差异。经过出菇实验，转基因草菇菌株pTV-1、pTV-3、pTV-7和对照菌株一样，均有子实体发育能力，而转基因草菇pTV-5、pTV-6、pTV-8未能正常出菇。