【摘 要】
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向日葵菌核病作为危害向日葵生产上最严重的病害之一,其生活史复杂、侵染过程多样、对向日葵的产量造成极大威胁。目前,利用化学农药防控手段是最有效的措施,但是由于向日葵核盘菌的侵染机制尚不明确,化学防治不能发挥最好的效果。因此,通过对野生型向日葵核盘菌株GN-1进行遗传转化,有助于了解向日葵核盘菌的致病机理,可以为今后生产上防治向日葵菌核病提供理论基础。1、以野生型向日葵核盘菌株GN-1为转化受体、以穿
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向日葵菌核病作为危害向日葵生产上最严重的病害之一,其生活史复杂、侵染过程多样、对向日葵的产量造成极大威胁。目前,利用化学农药防控手段是最有效的措施,但是由于向日葵核盘菌的侵染机制尚不明确,化学防治不能发挥最好的效果。因此,通过对野生型向日葵核盘菌株GN-1进行遗传转化,有助于了解向日葵核盘菌的致病机理,可以为今后生产上防治向日葵菌核病提供理论基础。1、以野生型向日葵核盘菌株GN-1为转化受体、以穿梭质粒p CAMBIA1303-Trp C-Hygo-gpd A-GFP（质粒带有潮霉素抗性基因,mgfp5绿色荧光蛋白基因,卡那抗性基因）为转化载体、农杆菌EHA105为转化供体,建立并优化了向日葵核盘菌农杆菌介导遗传转化的体系,潮霉素（终浓度40μg/m L）为筛选向日葵核盘菌转化子的有效浓度;在AS浓度为0.2 mmol/L、共培养天数4 d时,获得的转化子数量最多。2、以整合质粒PCT74为载体（质粒带有潮霉素抗性基因,eGFP绿色荧光蛋白基因,氨苄青霉素抗性基因）、以野生型核盘菌株GN-1的原生质体为转化受体建立并优化了PEG法介导向日葵核盘菌的遗传转化体系,研究结果显示,恒温水浴4 h时,有利于获得原生质体,原生质体的浓度达到1.56×107个/m L,获得转化子数量为301个。3、随机选取20个转化子对其致病性进行测定,结果表明:两种方法获得的转化子的致病性能够稳定遗传。有11个转化子的草酸分泌量高于野生对照菌株GN-1,9个转化子草酸分泌量低于GN-1。草酸分泌量最高的p GN-9的草酸分泌量最高为32.74μg/mg,p GN-20草酸分泌量最低为22.75μg/mg;有11个转化子的多聚半乳糖醛酸酶分泌量低于野生对照菌株GN-1,9个转化子多聚半乳糖醛酸酶分泌量高于GN-1。p GN-6的多聚半乳糖醛酸酶分泌量最高为56.22μg/mg,p GN-9最低为22.62μg/mg;p GN-9产生淀粉酶能力最强,pGN-4产生淀粉酶能力最弱。有6株转化子产生淀粉酶的能力低于GN-1;pGN-4产生蛋白酶能力最强,p GN-5产生蛋白酶能力最弱,有4个转化子蛋白酶分泌能力高于GN-1。20个转化子接种向日葵感病、抗感品种均能使其发病。综上所述,本研究建立的农杆菌及PEG介导向日葵核盘菌的遗传转化体系均可以产生稳定遗传并具有稳定致病力的转化子,为进一步研究核盘菌的致病机制奠定了理论基础。
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