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目前临床上牙体缺损修复的方法主要是采用复合树脂材料进行粘结充填。但由于牙本质结构特点和复杂的口腔环境,临床中牙本质树脂粘结技术的长效性面临着巨大的挑战。影响牙本质粘结长效性的因素主要包括两个方面:首先在粘结过程中粘结剂单体很难完全渗入到脱矿的牙本质胶原纤维中,在混合层底部脱矿胶原纤维与树脂间存在大量的微间隙;另外暴露的牙本质胶原纤维内基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)受到酸性环境的影响被激活分解树脂-牙本质界面。近几年来有研究提出通过抑制牙本质MMP、增强牙本质机械性能促进再矿化的方法来提高牙本质粘结长效性,但目前研究的方法往往从单方面机制解决问题,临床效果不确定。本课题将氯己定(Chlorhexidine,CHX)与末端为羧基基团的聚酰胺-胺树枝状聚合物(Carboxyl-terminated polyamidoamine dendrimers,PAMAM-COOH)结合,研究其对牙本质粘结长效性的影响。目的:将CHX结合到G4.0 PAMAM-COOH合成CHX-PAMAMCOOH复合物,研究其对游离型MMP-2、牙本质内结合型MMP活性的影响和诱导牙本质再矿化的作用。方法:合成CHX-PAMAM-COOH,使用紫外分光光度计检测结合量,傅里叶红外光谱检测表面基团。设置实验分组:CHX-PAMAMCOOH组、PAMAM-COOH组、CHX组和对照组(去离子水组)。采用基质金属蛋白酶活性荧光测定试剂盒检测各组对游离人重组基质金属蛋白酶2(Recombinant human MMP-2,rhMMP-2)和牙本质内结合型MMP活性的影响;检测经实验液处理30天后脱矿牙本质样本干重损失量;通过原位酶谱法定性研究不同实验组对牙本质内基质金属蛋白酶活性作用;用不同实验液处理脱矿牙本质小块样本,在人工唾液中孵育7天及14天后使用场发射扫描电镜(SEM)观察各组牙本质表面再矿化。使用SPSS24.0软件对数据进行统计学分析。结果:(1)紫外分光光度计检测结果表明不同浓度的CHX都能与PAMAM-COOH结合,2%CHX与PAMAM-COOH结合量最大;傅里叶红外光谱结果显示CHX特征峰的出现在PAMAM-COOH基团表面,提示CHX吸附到PAMAM-COOH表面。(2)rhMMP-2活性检测结果显示PAMAM-COOH组蛋白酶活性增加明显;CHX-PAMAM-COOH组和CHX组对rhMMP-2活性表现出抑制作用,但1小时反应后这两组差异无统计学意义(P>0.05)。(3)牙本质内MMP活性检测结果表明PAMAM-COOH组牙本质内结合型MMP活性无明显影响(P>0.05);而与对照组相比,CHX-PAMAM-COOH组和CHX组牙本质内结合型MMP活性均降低(P<0.001),处理30分钟时CHX-PAMAM-COOH对牙本质内结合型MMP活性的抑制效果的效果优于CHX组(P<0.001)。(4)干重结果显示30天后四组牙本质样本干重质量均下降,与对照组相比CHX-PAMAM-COOH组和CHX组干重质量变化明显减少,与CHX组相比CHX-PAMAM-COOH组干重损失更少(P<0.05)。(5)原位酶谱结果与牙本质内结合型MMP活性检测结果一致,CHXPAMAM-COOH组处理后牙本质样本与胶原酶底物反应48小时后几乎不能观察到绿色荧光,提示其具有较好的牙本质胶原酶抑制作用。(6)经CHX-PAMAM-COOH和PAMAM-COOH处理后的牙本质浸泡于人工唾液2周后SEM观察到表面出现明显的针状矿化晶体,作用强于CHX组。结论:CHX-PAMAM-COOH能够在牙本质表面发挥双重作用,能有效抑制游离型rhMMP-2活性和脱矿牙本质内结合型MMP活性,又能诱导脱矿牙本质再矿化,具有增强牙本质粘结长效性的潜能。