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本文利用大肠杆菌原核表达系统高效表达了重组E2蛋白，为后续以重组E2蛋白为基础的间接ELISA法的建立创造了条件。主要试验包括： 1）建立了以猪瘟兔化弱毒（CSFLV）为包被抗原的间接ELISA并制备了兔抗CSFLV高免血清。利用层析方法分离浓缩后的含毒细胞培养上清中的CSFLV，鉴定表明8＃、9＃收集样品含有高浓度的CSFLV。家兔体温反应表明注射8＃、9＃样品试验兔出现了典型定型热反应。初步建立了以纯化CSFLV为包被抗原的间接ELISA方法。8＃、9＃抗原的最佳抗原蛋白包被浓度分别为17.44ug/ml、15.75ug/ml。抗原包被的条件、待测血清的吸附条件、HRP-SPA二抗作用条件均为37℃，1小时。显色条件为：37℃，15分钟温育，即刻终止显色反应。制备了8＃抗原的油包水型疫苗（弗氏佐剂），免疫家兔。每只家兔接受的抗原蛋白免疫量依次递增：首免：0.625mg/次·只；二免：1mg/次·只；三免：1.4mg/次·只。最后得到效价在1：20000以上（间接ELISA法测定）的兔抗CSFLV血清。 2）构建了含E2基因编码片段的重组原核表达载体pThioHisB-e2。对已知E2基因序列分析后，利用聚合酶链式反应（PCR）方法从克隆化E2全基因中扩增长360bp的特异片段，并在扩增片段两端引入SalⅠ、PstⅠ酶切位点。PCR结果表明扩增出符合预期分子量大小的DNA片段，扩增产物命名为e2。e2包括编码E2蛋白保守性及中和性抗原结构域单位A、D区的序列以及软件分析表明抗原指数较高的一段序列。将e2克隆到表达载体pThioHisB对应酶切位点之间，得到重组质粒pThioHisB-e2，其宿主菌命名为TOPe2。诱导表达试验表明插入片段e2得到了表达：融合蛋白Thio-e2分子量符合预期设计，大小为29.7Kd。免疫转印试验证实Thio-e2具有猪瘟病毒抗原性。 3）为验证E2全基因在大肠杆菌中重组表达的可行性及表达产物的抗原性，构建了含E2全基因的重组原核表达质粒pET32E2。由pcDNA3STE2质粒BamHⅠ、EcoRⅠ位点间分离E2全基因并克隆到原核表达载体pET32-a质粒中，得到重组质粒为pET32E2。其宿南京农业大学硕士论文 中文摘要主菌命名为BLEZ。诱导试验表明菌体内EZ全基因得到表达，融合蛋白Thi。EZ的分子量为引厂Kd，符合预期设计。免疫转印试验证实 Thi。－EZ具有猪瘟病毒抗原性。 4）研究了TOPeZ菌的诱导表达条件。从诱导时间、诱导剂浓度、诱导培养温度、诱导剂种类几方面研究其对Thicr－－eZ蛋白表达的影响，确定TOPeZ诱导优化条件为：诱导时，TOPeZ菌液浓度为 OD。；。＂m＝＝0．5～0石：37C培养温度；0．lmM IPTG诱导剂；诱导后 4～5 ．J’时收获菌体。按优化条件诱导表达 Thio．eZ可占菌体总蛋白的 17．6％。 5）对表达的Thio．eZ蛋白进行了提取试验。未能以渗透休克法促使诱导后的TOPeZ菌体释放Thio－eZ。溶菌酶裂解法处理诱导后的TOPeZ菌体，只从菌体裂解物上清中回收了少量Thio．eZ蛋白。仍需研究提取诱导表达的Thio．eZ的条件。