丹参酮ⅡA联合脐带间充质干细胞对急性肺损伤大鼠的干预作用研究

来源 :湖南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wzy_shun
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目的:建立急性肺损伤(ALI)模型,通过观察丹参酮ⅡA联合脐带间充质干细胞对ALI大鼠体重、外观、肺组织病理、肺水肿指数、炎症因子、Claudin-5、ZO-1及VE-Cadherin蛋白表达水平的影响,初步探讨丹参酮ⅡA联合脐带间充质干细胞对ALI大鼠的疗效。方法:(1)将SPF级成年雄性大鼠60只按照随机数字表法分为5组,每组各12只,其中A组为空白组,B组为模型组,C组为UCMSCs组,D组为丹参酮ⅡA组,E组为丹参酮ⅡA+UCMSCs组。除A组外,其它4组均予一次性腹腔注射脂多糖(5mg/kg)建模;造模后予A、B组大鼠腹腔和尾静脉注射生理盐水、C组大鼠腹腔注射生理盐水,尾静脉注射UCMSCs、D组大鼠腹腔注射丹参酮ⅡA注射液,尾静脉注射生理盐水、E组大鼠腹腔注射丹参酮ⅡA注射液且尾静脉注射UCMSCs,各组腹腔注射均为造模后连续7天注射10ml/kg/d,尾静脉注射为造模后单次注射1ml。分别于第7天末次腹腔注射丹参酮ⅡA后处死大鼠,测大鼠体重、对大鼠进行外观评价;使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清促炎症细胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达;对肺组织进行HE染色、检测肺组织湿/干重比(W/D)、肺体指数(L/B),检测肺泡灌洗液计算肺通透指数(LPI);蛋白印迹法(Western Blot,WB)检测大鼠肺组织AngⅠ/AngⅡ、Claudin-5、ZO-1及VE-Cadherin蛋白表达水平。对相关实验指标统计分析,初步探讨丹参酮ⅡA联合脐带间充质干细胞对ALI大鼠的疗效。结果:(1)各组大鼠体重评价的比较:实验前各组大鼠体重无统计学差异(P>0.05)。造模后第7天,各组大鼠体重由高到低分别为A组、E组、D组、C组、B组。除C、D、E三组间无显著差异,其余各组均差异显著(P<0.05)。(2)大鼠外观的比较:B组大鼠于腹腔注射LPS当日死亡2只,余下各组大鼠均未出现非处理性死亡,A组大鼠精神状态好,呼吸、饮食和排便均正常,体重增加较快。与A组相比,B组大鼠精神逐渐变差,活动减少,反应变差,呼吸较促,进食少,体重增加缓慢甚至下降。C组、D组、E组三组大鼠一般情况优于同期的B组大鼠,精神较好,活动及反应尚可,呼吸较平顺,进食排便可,体重有所增加。(3)肺水肿检测:肺湿/干重比,肺体指数,肺通透指数。各组大鼠肺组织W/D由高到低为B组、C组、D组、E组、A组,除C、D两组无显著差异,其余各组均具有统计学差异(P<0.05)。各组大鼠肺组织L/B、LPI由高到低为B组、D组、C组、E组、A组,除C、D两组无显著差异,其余各组均显著(P<0.05)。E组的W/D、L/B及LPI明显低于B、C、D三组(P<0.05)。(4)各组大鼠肺组织病理评分的比较:各组肺组织病理评分由高到低分别为B组、D组、C组、E组、A组,其中C、D组两组间结果接近(P>0.05),其余各组间的差异均明显(P<0.05)。E组病理评分的明显低于B、C、D三组(P<0.05)。(5)各组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α及VEGF水平的比较:各组大鼠IL-1β、TNF-α水平由高到低分别为B组、D组、C组、E组、A组,除C、D组两组间结果接近(P>0.05),其余各组之间的差异均显著(P<0.05)。各组大鼠VEGF水平水平由高到低分别为B组、C组、D组、E组、A组。除C、D组两组间差异不明显(P>0.05),其余各组之间的差异均显著(P<0.05)。各组大鼠IL-6水平由高到低分别为B组、D组、C组、E组、A组,各组之间的差异均明显(P<0.05)。(6)各组大鼠肺组织AngⅠ、AngⅡ水平的比较:各组大鼠肺组织Ang Ⅰ水平由高到低分别为A组、E组、D组、C组、B组。除C、D组两组间结果接近(P>0.05),其余各组之间的差异均明显(P<0.05)。E组AngⅠ水平明显高于C组、D组两组,差异显著(P<0.01)。各组大鼠肺组织Ang Ⅱ水平由高到低分别为B组、D组、C组、E组、A组。除C、D组两组间无明显差异(P>0.05),其余各组间均差异明显(P<0.05)。E组Ang Ⅱ水平明显低于C组、D组两组,差异显著(P<0.01)。(7)各组大鼠肺组织VE-cadherin、Claudin-5及ZO-1蛋白水平的比较:各组大鼠肺组织VE-cadherin、Claudin-5蛋白水平由低到高分别为B组、D组、C组、E组、A组。除C、D组两组间结果接近(P>0.05),其余各组之间的差异均显著(P<0.05)。各组大鼠肺组织ZO-1蛋白水平由低到高分别为B组、C组、D组、E组、A组。除C、D组两组间差异不显著(P>0.05),余下各组之间的差异均显著(P<0.05)。B组VE-cadherin、Claudin-5及ZO-1蛋白水平显著低于A组、C组、D组和E组,差异具有统计学意义(P<0.05)。E组的VE-cadherin、Claudin-5、ZO-1蛋白水平显著高于B、C、D组三组(P<0.01)。结论:(1)丹参酮ⅡA、UCMSCs及两者联合使用均可减轻急性肺水肿,减轻炎症反应,延缓急性肺损伤进程,且二者联合使用对于急性肺损伤早期尤其是急性肺水肿的干预作用可能更为显著。(2)丹参酮ⅡA、UCMSCs及两者联合使用干预急性肺损伤可能与抑制IL-1β、IL-6、TNF-α及VEGF炎症因子的表达、降低AngⅡ水平,上调AngⅠ、粘附因子VE-cadherin及紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1的表达有关。
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