乳腺炎是由多种病原微生物引起的乳腺炎症,是乳及乳制品中有害细菌的主要来源,是危害人畜健康的共患病。尤其是环境性乳腺炎,病因复杂,病原菌种类比较多,因此本试验在前人对引起内蒙地区环境性乳腺炎的主要病原菌分离鉴定的基础上,对主要病原菌进行了免疫原性分析并进行了疫苗研制,希望为内蒙地区环境性乳腺炎的防治提供新的方法和途径。为筛选免疫原性好抗原谱广泛的临床分离菌株,研究了两株大肠杆菌(A 1,A 2 )及两株克雷伯氏菌(K1 ,K2 )的菌体蛋白图谱和菌体蛋白转印图谱,结果显示A 1和K1的菌体蛋白条带和菌体蛋白转印图谱较浓,而A 2和K2较淡,为进一步对其免疫原性进行分析,用建立的全菌包被ELISA试验检测免疫后兔血清中的抗体水平和交叉保护性,筛选到两株具有典型抗原谱、保护性抗原全面的菌株(大肠杆菌A1和克雷伯氏菌K1)作为疫苗株。将筛选好的两株疫苗株(大肠杆菌A1和克雷伯氏菌K1)的菌悬液用甲醛灭活并经过无菌检验后,选用铝胶佐剂制备出灭活疫苗,经过安全性检验后,对家兔免疫三次后采血,用全菌包被ELISA试验检测兔血清中抗体效价,结果表明该疫苗不仅安全而且免疫后能有效激发家兔产生抗大肠杆菌和克雷伯氏菌的抗体。在鼠动物模型中,进行攻毒保护力试验,结果显示用该疫苗三次免疫后,能有效抵抗同源和不同血清型强毒力大肠杆菌和克雷伯氏菌的攻击。为评价奶牛环境性乳腺炎灭活疫苗防治奶牛环境性乳腺炎的效果,在内蒙古农业大学教学牧场进行了疫苗本动物免疫试验。为评价疫苗免疫效果建立了全菌包被ELISA试验来检测血清和乳清中的抗体效价。在对试验奶牛三次免疫后,结果发现免疫组血清和乳清中的抗体效价与对照组和免疫前相比均有显著提高,并采集试验奶牛的乳样进行体细胞数测定,结果表明免疫组与对照组及免疫前相比体细胞数均有不同程度的下降。