酶法拆分2-芳基丙酸类药物的研究

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布洛芬(Ibuprofen,2 (4异丁基苯基)丙酸)俗称芬必得,是一种重要的2芳基丙酸类非甾体抗炎药物,其消炎、镇痛、解热作用显著,不良反应较小。研究表明(S)布洛芬的药理活性为(R)布洛芬的100倍,且(R)布洛芬可能有毒副作用。为了提高药效,降低药物的毒副作用,减少并发症及正确评价药物,消旋布洛芬的立体拆分就显得尤为重要,并已成为当前研究的一个热点。目前,文献报道的生物法拆分2芳基丙酸类药物的途径主要是用酶或微生物进行立体选择性水解(酯、酰胺和腈)、酯化等。酶催化的有机反应具有条件温和、无环境污染、速率快、选择性高等优点。虽然非水相酶催化反应的后处理方便,但传统的有机溶剂限制了酶的活性和稳定性。人们一直试图解决酶的固定化和在有机溶剂中失活的问题。近年来,用表面活性剂包衣酶催化有机介质中的反应成为酶工程领域的新技术。而用离子液体代替传统的有机溶剂作为酶催化反应的介质,也受到人们越来越多的关注。本论文中采用了来源于Candida cylindrucea的脂肪酶,并对该脂肪酶催化布洛芬酯立体选择性水解反应体系进行了研究。首先,考察了在水饱和离子液体中游离酶催化的水解反应。结果表明,在[BMIM][BF4]离子液体中,最佳的反应条件为:pH 7.5,40℃,体系酶的含量为30 mg/ml时,反应体系的ee值和转化率达到最大值。同时,探索研究了微乳液凝胶固定化脂肪酶对水解反应的影响,在相同的实验条件下,与游离的脂肪酶相比酶的活性和立体选择性得到了提高。其次,制备合成了包衣用的谷氨酸二烷基酯并对脂肪酶进行包衣,考察了表面活性剂包衣脂肪酶在N,N二甲基甲酰胺和磷酸缓冲溶液组成的单相共溶体系中催化布洛芬酯选择性水解反应,对反应的各影响因素进行了评价,并确定了包衣脂肪酶催化的最佳反应条件:20%(v/v)DMF,pH 7.5,40 oC。同时,对表面活性剂包衣脂肪酶和无修饰天然酶的催化动力学参数进行了研究,结果表明脂肪酶经过包衣后在有机溶剂和缓冲液混溶体系中与游离酶相比具有更高的催化活性和的立体选择性。
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