非生物胁迫严重影响栽培柑橘的产量、品质以及栽培范围,其中低温是重要的原因之一。采用基因工程是创制抗寒柑橘种质的有效手段,利用抗寒资源开展低温应答机制解析及发掘和鉴定抗寒关键基因是重要的基础与前提。漆酶(Laccase,LAC)是一种含铜的糖蛋白氧化酶,参与高等植物的木质素合成以及逆境胁迫响应.目前漆酶在柑橘抗寒中的作用尚不清楚。本研究分析了漆酶基因家族在低温胁迫下表达情况,筛选到低温应答强烈的基因成员。在此基础上,对CsLAC18进行了功能鉴定及机理初步解析。主要结果如下:1、对甜橙幼苗进行低温胁迫(4℃)处理,分析甜橙叶片的漆酶活力和木质素含量的变化.结果表明,漆酶活力被低温诱导上调,木质素含量也随之上升。采用实时定量PCR技术研究了甜橙漆酶基因家族各成员在低温处理下的表达模式.结果表明,多数甜橙漆酶基因响应低温胁迫,但表现出不同的表达模式,其中表达上调最强烈的是CsLAC18。CsLAC18全长1743 bp,编码580个氨基酸.亚细胞定位分析表明该基因定位于细胞膜上。2、为验证CsLAC18的抗寒功能,通过转基因方法获得了超表达的烟草与基因沉默枳植株。超表达CsLAC18的烟草植株在低温胁迫下表现出更高的耐受性.相对于野生型烟草超表达植株具有低的电导率、MDA和活性氧含量,高的光合效率、成活率、抗氧化水平和漆酶活力。相反的,CsLAC18沉默系枳植株在低温胁迫下表现出更高的敏感性。可见CsLAC18在柑橘低温响应中可能起正调控的作用。3、克隆了 CsLAC18的启动子序列,启动子元件分析表明,在CsLAC18的启动子上含有数个不同转录因子结合的元件。通过酵母单杂筛库技术获得多个CsLAC18上游的可能调控基因,如Cs4g02630,按照基因描述是一个E3泛素连接酶.