【摘 要】
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背景:BMPR-Ⅱ基因为Ⅱ型骨形成蛋白受体（BMPR-Ⅱ）的编码基因,BMPR-Ⅱ是一跨膜Ser/Thr激酶受体,其配体分子为骨形成蛋白（BMPs）。BMPs属于TGF-β超家族成员,BMP信号通路具有广泛的生物学功能,涉及到骨的形成与再生、哺乳动物的早期发育等方面。近年来发现BMPR-Ⅱ基因突变或表达异常与家族原发性肺动脉高血压及多种肿瘤的发生和转移有关,然而有关BMPR-Ⅱ基因的表达调控目前知
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背景:BMPR-Ⅱ基因为Ⅱ型骨形成蛋白受体（BMPR-Ⅱ）的编码基因,BMPR-Ⅱ是一跨膜Ser/Thr激酶受体,其配体分子为骨形成蛋白（BMPs）。BMPs属于TGF-β超家族成员,BMP信号通路具有广泛的生物学功能,涉及到骨的形成与再生、哺乳动物的早期发育等方面。近年来发现BMPR-Ⅱ基因突变或表达异常与家族原发性肺动脉高血压及多种肿瘤的发生和转移有关,然而有关BMPR-Ⅱ基因的表达调控目前知之甚少。越来越多的研究表明,上游开放读码框（upstream openreading frame,uORF）在调节某些基因的表达方面具有重要作用。生物信息学分析显示BMPR-Ⅱ基因是一个富含uORFs的基因,这些uORFs是否参与其表达调控目前尚无研究报道。目的:初步探讨BMPR-Ⅱ基因中的uORFs是否会影响其表达,为深入研究该基因的表达调控奠定基础。方法:以野生型DNA片段（包含BMPR-Ⅱ基因启动子和5′前导序列,总长1534bp）为模板,通过重叠延伸PCR,将其5个uORFs中的起始密码子分别进行突变,再将野生型片段和突变型片段分别克隆到载体pGL3-Basic上,构建6个重组荧光素酶报告基因表达质粒:pGL3-Basic-1534（野生型）、pGL3-Basic-MuORF1、pGL3-Basic-MuORF2、pGL3-Basic-MuORF3、pGL3-Basic-MuORF4、pGL3-Basic-MuORF5。将这些质粒分别转染Hela细胞,采用双荧光素酶报告试验系统检测其荧光素酶表达量,分别比较各突变型质粒和野生型质粒的荧光素酶表达量,藉此判断各uORF对基因表达的可能影响。结果:同pGL3-Basic-1534（野生型）的荧光素酶表达活性相比,pGL3-Basic-MuORF1、pGL3-Basic-MuORF2、pGL3-Basic-MuORF4、pGL3-Basic-MuORF5的荧光素酶表达活性均有不同程度的增高;而pGL3-Basic-MuORF3的荧光素酶表达活性有所降低。结论:初步的研究结果表明:uORF1、uORF2、uORF4、uORF5对BMPR-Ⅱ基因的表达具有负调控作用,并且这些uORFs的负调控效率与其长度和G-C含量有一定的正相关性;而uORF3对BMPR-Ⅱ基因的表达可能具有正调控作用。
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