【摘 要】
：
目的:通过观察在MPP+（1-甲基-4-苯基吡啶）诱导的帕金森炎症细胞模型中,丁酸钠（Sodium butyrate,Na B）对小胶质细胞炎症反应的影响,探讨丁酸钠调控炎症反应的机制是否与ATP敏感性钾通道(KATP)有关。方法:1.使用MPP+在BV2小胶质细胞上制备帕金森炎症细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度MPP+和丁酸钠处理24h后对BV2小胶质细胞活性的影响,选择合适的实验浓度。2.
论文部分内容阅读
目的:通过观察在MPP+（1-甲基-4-苯基吡啶）诱导的帕金森炎症细胞模型中,丁酸钠（Sodium butyrate,Na B）对小胶质细胞炎症反应的影响,探讨丁酸钠调控炎症反应的机制是否与ATP敏感性钾通道(KATP)有关。方法:1.使用MPP+在BV2小胶质细胞上制备帕金森炎症细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度MPP+和丁酸钠处理24h后对BV2小胶质细胞活性的影响,选择合适的实验浓度。2.将BV2小胶质细胞分为4组,分别为空白对照组、MPP+造模组、Na B预处理组和吡那地尔预处理组（即阳性对照组）。3.光学显微镜下观察空白对照组和MPP+造模组中BV2细胞形态变化,细胞免疫荧光分别检测4组中BV2小胶质细胞上电离钙结合适配器分子1（Iba-1）的表达情况。3.采用NO试剂盒来比较不同组间中BV2细胞NO的产生量。4.通过实时荧光定量（q PCR）法检测四组中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的m RNA表达水平,观察丁酸钠对炎症因子释放的影响。5.比色法检测4组细胞内ATP含量的变化,观察丁酸钠对小胶质细胞上KATP通道开放的影响。6.运用实时荧光定量PCR（q PCR）及western blot方法检测空白对照组、MPP+造模组及丁酸钠预处理组中KATP通道亚基的表达情况。结果:1.CCK8结果显示,使用不同浓度（50μmol/L-2mmol/L）MPP+处理BV2小胶质细胞后,与空白对照组相比,几种不同浓度的MPP+均使细胞活性下降且具有统计学意义（P<0.05）;不同浓度的丁酸钠（1.25mmol/L-10mmol/L）对BV2小胶质细胞均无毒性作用。选择100μmol/L的MPP+进行实验。2.CCK8检测结果表明不同浓度的丁酸钠（1.25mmol/L-10mmol/L）对BV2小胶质细胞均无毒性作用。而不同浓度的丁酸钠（1.25mmol/L、2.5mmol/L和5mmol/L）均能提高MPP+诱导降低的BV2细胞存活率,且具有统计学意义（P<0.05）,选择5mmol/L的丁酸钠进行实验。3.光镜下观察到对照组中的BV2小胶质细胞为静息态,而MPP+造模组中为激活态。细胞免疫荧光显示MPP+造模组中BV2小胶质细胞上Iba-1的荧光强度与对照组相比明显增强,表明MPP+能激活BV2小胶质细胞,而Na B和吡那地尔均能抑制BV2小胶质细胞上增强Iba-1的荧光强度,表明Na B和吡那地尔都能抑制BV2小胶质细胞的激活。3.NO试剂盒检测的结果显示,MPP+造模组中的BV2小胶质细胞产生的NO明显增加,而给予丁酸钠预处理后BV2细胞显著减少了NO的产生,这与吡那地尔预处理组中的结果类似。4.实时荧光定量PCR（q PCR）检测不同实验组中炎症因子的表达情况,检测结果发现MPP+能明显增加BV2小胶质细胞中IL-6和TNF-α的表达,而丁酸钠预处理组和吡那地尔预处理组处理后能显著抑制MPP+激活的BV2小胶质细胞中IL-6和TNF-α,但IL-1β表达水平没有被丁酸钠抑制。5.与空白对照组相比,MPP+造模组中BV2小胶质细胞内的ATP含量显著减少,而与吡那地尔预处理组一样,丁酸钠预处理组均逆转了BV2小胶质细胞内下降的ATP含量,表明丁酸钠促进了BV2小胶质细胞上KATP通道的开放。6.BV2小胶质细胞上表达KATP通道的SUR1、SUR2A亚基以及Kir6.1和Kir6.2亚基,不表达SUR2B亚基;与MPP+造模组相比,丁酸钠预处理组中Kir6.1和Kir6.2亚基的m RNA水平明显上调,而Kir6.1和Kir6.2的蛋白表达水平随时间的延长出现明显增加,具有时间依赖性。SUR1和SUR2A亚基的m RNA水平和蛋白水平则均无明显改变。结论:1.丁酸钠对MPP+激活的BV2小胶质细胞具有保护作用。2.丁酸钠能抑制MPP+诱导的BV2小胶质细胞的活化,并抑制其释放NO和炎症因子。3.激活KATP通道也能抑制MPP+诱导的BV2小胶质细胞的激活,减少NO和炎症因子的产生。4.在PD炎症细胞模型中,丁酸钠通过上调Kir6.1亚基和Kir6.2亚基的表达和促进KATP通道开放的方式调控KATP通道,从而抑制了小胶质细胞的激活,减少了小胶质细胞释放的NO和促炎因子,减轻了炎症反应。
其他文献
目的:调查社区缺血性脑卒中后出现认知障碍的患者血压、血脂控制情况,并探讨积极控制血压、血脂水平能否有效改善认知障碍程度。方法:选取海南省海口市不相邻两社区中自2018-4-1至2019-3-31期间明确诊断为缺血性脑卒中且在6个月至1年内出现认知功能减退的患者为研究对象。筛选出符合入组标准的患者并建立疾病健康档案,记录个人资料、生活习惯、血压、血脂与血糖情况,采用简易精神状态检查表（Mini-me
目的:本研究通过meta分析比较表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（Epidermal growth factor receptor-Tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs）联合抗血管靶向药与EGFR-TKIs对晚期非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）患者的疗效及安全性。方法:分别检索Pub Med、EMBASE和The
目的:槟榔依赖（Betel quid dependence,BQD）是一种以失去自我控制、强迫性反复用药为特征的慢性复发性脑疾病,长期嚼食槟榔（Betel quid）增加口腔癌变等多种肿瘤以及其他慢性疾病的患病风险,目前其成瘾机制不清、尚无有效疗法,本研究探讨槟榔依赖者脑功能网络拓扑学性质的改变情况,拟为BQD的脑网络神经机制提供影像依据,进而为槟榔依赖的预防和干预提供线索。方法:收集53例BQD
目的:通过检测帕金森病（Parkinson’s disease,PD）患者血清维生素D、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）和多巴胺（Dopamine,DA）水平,探讨人血清维生素D与5-HT、DA水平和PD伴抑郁的相关性,为PD伴抑郁患者寻找有效治疗措施提供临床理论依据。方法:选择2018年3月至2020年1月期间在海南医学院第一附属医院确诊符合入组标准的PD患者80例
目的:探讨激活转录因子-2（activating transcription factor-2,ATF-2）在弥漫大B细胞淋巴瘤,非特指（diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL,NOS）中表达的意义,并分析其表达与DLBCL（NOS）的临床病理特征及预后之间的关系。方法:收集60例DLBCL（NOS）病例及40例淋巴结反应性增生（reactive hyperplas
研究目的:通过Meta分析比较射频消融（radiofrequency ablation,RFA）联合肝动脉化疗栓塞术（transcatheter arterial chemoembolization,TACE）与手术切除（Surgical Resection,SR）治疗早期肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的总生存率（overall survival rate,O
目的:探究慢性睡眠剥夺对小鼠学习记忆功能的影响;探究自噬在慢性睡眠剥夺小鼠海马Aβ沉积过程中的作用及机制。方法:选取C57雌性小鼠40只,随机分为对照组与实验组,实验组分为:慢性睡眠剥夺组（CSD组）、慢性睡眠剥夺+雷帕霉素组（CSD+RAPA组）、慢性睡眠剥夺+3-甲基腺嘌呤组（CSD+3-MA组）,每组10只;实验组采用改良多平台水环境法（MMPM）,小鼠每天被剥夺睡眠20小时,持续剥夺50天
【目的】通过对比改良强制运动（mCIMT）与双上肢同向运动（IPMBAT）对脑卒中偏瘫患者上肢运动功能、生活自理能力的影响,为脑卒中偏瘫患者上肢训练及康复延伸护理提供临床思路。【方法】本研究选取2018年11月到2019年12月,海口市某康复疗养院神经康复科缺血性脑卒中偏瘫患者作为研究对象,共纳入患者50人,采用随机数字法以及密封信封技术,将患者分为mCIMT组与IPMBAT组,每组25人,分别完
目的:观察功能性体适能训练结合卒中后综合康复训练对脑卒中合并冠心病患者的体适能,即有氧耐力、肌力、平衡功能、身体柔韧性,以及日常生活活动能力的影响。方法:将21例脑卒中合并冠心病患者纳入研究,随机分为实验组和对照组,实验组11例,对照组10例,实验组采用常规药物治疗、卒中后综合康复训练及功能性体适能训练治疗,对照组仅采用常规药物治疗及卒中后综合康复训练,治疗时长均为4周。两组治疗前后均进行2分钟踏
目的:由于前循环大血管闭塞导致的急性缺血性卒中患者24h内行血管内治疗是安全可行的。但对发病时间窗超24h的颅内大血管闭塞所致进展性卒中患者行血管内治疗是否安全有效,目前偶有个案报道,但尚无多中心大数据研究。本研究旨在将发病超时间窗24h的颅内大血管闭塞所致进展性卒中患者行血管内治疗与内科药物治疗比较,分析两组患者治疗效果及安全性。方法:纳入于2016年1月至2019年12月在我院卒中中心进行治疗