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犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)自1978年发现以来,在全世界迅速传播并严重威胁着养犬业的发展。可导致犬急性出血性肠炎和心肌炎,是发病率最高的犬病原体之一。目前许多血清学和分子试验都可用于此疾病的准确诊断,适当的临床治疗也可使患犬迅速痊愈,而接种疫苗始终是控制此病的最佳策略。尽管普遍用于免疫的犬细小弱毒疫苗在预防感染上是非常有效的,但其安全问题始终令人担忧,然而尚未有新型疫苗批准上市,因此急需开发一种安全有效的替代疫苗。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒衣壳蛋白自行装配的蛋白颗粒,因其缺少病毒DNA所以不具备宿主体内复制的能力。本实验利用大肠杆菌以低廉的成本获得了大量具有活性的重组VP2蛋白,此蛋白可自行装配成免疫原性良好的VLPs,主要分为以下三个部分:1.人工合成CPV VP2蛋白全长基因,构建表达载体pET30a-VP2后与伴侣蛋白质粒pTf16共转入BL21进行诱导表达,琼脂糖凝胶电泳结果表明已成功构建了VP2重组表达载体,对表达产物进行SDS-PAGE分析,可见大小约为70 kDa的VP2蛋白,与未转入pTf16的菌体表达产物相比,转入此伴侣蛋白后可溶VP2蛋白表达量增多。2.镍柱纯化破碎后的菌液上清,检测其反应原性和血凝性,用动态光散射和透射电镜分析VLPs的体外组装情况。结果表明纯化后VP2蛋白纯度约为90%,可被CPV特异性抗体所识别,具有良好的反应原性。当透析液的组成为50 mM Tris,250 mM NaCl,pH 8.0时,VP2蛋白可自行组装成形状和大小与天然CPV类似的VLPs。3.以VLPs免疫豚鼠后对其体液免疫反应进行评估,发现可诱发高水平的血凝抑制抗体和中和抗体。用CPV刺激免疫后的豚鼠脾淋巴细胞,ELISA检测结果表明其可分泌一定浓度的IFN-γ和IL-4。证明此VLPs可诱导豚鼠产生特异性的细胞和体液免疫反应,具有良好的免疫原性。综上所述,本实验通过在大肠杆菌中共表达伴侣蛋白Tf16,获得了大量可溶性CPV VP2蛋白。这些蛋白可自发形成与天然犬细小病毒大小形状类似的颗粒,该颗粒可刺激豚鼠产生较强的特异性免疫反应。因此上述Tf16共表达系统为大量生产高免疫原性的CPV VLPs提供了新的方法。相信通过持续的优化,此候选疫苗可以在未来成功上市。