【摘 要】
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第一章Ⅰ型胶原覆层纤维载体的制备和表征目的:制定合适的肝细胞培养载体,为肝细胞培养提供良好的生长环境,维持细胞高密度生长和功能维持,是生物人工肝研究的关键。本章研究旨在制备一种适于肝细胞生长的Ⅰ型胶原覆层纤维载体。方法:1、使用Piranha溶液对PP纤维表面进行羟基化修饰,选用反应温度、时间和Piranha溶液的比例作为工艺参数进行正交实验,表征分析得到最佳工艺条件和参数。2、使用硅烷偶联剂对羟
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第一章Ⅰ型胶原覆层纤维载体的制备和表征目的:制定合适的肝细胞培养载体,为肝细胞培养提供良好的生长环境,维持细胞高密度生长和功能维持,是生物人工肝研究的关键。本章研究旨在制备一种适于肝细胞生长的Ⅰ型胶原覆层纤维载体。方法:1、使用Piranha溶液对PP纤维表面进行羟基化修饰,选用反应温度、时间和Piranha溶液的比例作为工艺参数进行正交实验,表征分析得到最佳工艺条件和参数。2、使用硅烷偶联剂对羟基化PP纤维表面进行氨基活化修饰,选用反应温度、时间、浓度和硅烷偶联剂类型作为工艺参数进行正交实验,表征分析得到最佳工艺条件和参数。3、使用戊二醛对氨基活化PP纤维表面进行交联,选用反应温度、时间和浓度作为工艺参数进行正交实验,表征分析得到最佳工艺条件和参数。4、使用Ⅰ型胶原对戊二醛交联的PP纤维表面进行覆层,选用反应温度、时间和浓度作为工艺参数进行正交实验,表征分析得到最佳工艺条件和参数。结果:1、通过Piranha溶液对PP纤维表面羟基化修饰,成功引入羟基活性基团,最佳工艺参数是反应温度:90℃,反应时间:60min,Piranha溶液浓H2SO4/30%H2O2比例为3:1。2、氨基硅烷对羟基化的PP纤维表面成功氨基活化,引入氨基活性基团,最佳工艺参数是反应试剂:APTES,反应浓度:10%,反应温度:60℃,反应时间:60min。3、使用戊二醛对氨基活化的PP纤维表面成功进行交联,引入醛基活性基团,最佳工艺参数是反应温度:20℃,反应时间:120min,反应浓度:5%。4、使用Ⅰ型胶原成功对戊二醛交联的PP纤维表面进行覆层改性,最佳工艺参数是反应温度:30℃,反应时间:24h,反应浓度:2.5%。结论:建立一种Ⅰ型胶原共价覆层PP纤维载体的最佳工艺,成功制备Ⅰ型胶原牢固、均匀覆层的PP纤维支架。第二章Ⅰ型胶原覆层纤维载体的生物学评价目的:通过对Ⅰ型胶原覆层纤维载体（PP-OKGC）进行生物学评价,为进一步的应用提供安全性和功能性基础。方法:1、提取PP-OKGC纤维材料的浸提液,分别进行戊二醛残留量、细胞毒性、溶血反应、皮肤刺激反应、皮内刺激反应、急性和亚急性全身毒性反应实验,分别使用HPLC、MTT、分光光度计和组织切片进行检测,评价PP-OKGC的生物相容性。2、将HepG2细胞分别种植在PP-OKGC及未处理PP纤维（PP-N）纤维载体上,于第1、3、5和7天提取纤维载体和培养液,检测观察HepG2在PP-OKGC和PP-N纤维载体上粘附、增殖、细胞活性、细胞形态和细胞功能变化,评价PP-OKGC的生物活性。结果:1、PP-OKGC材料无毒性和刺激性,具有良好的生物相容性。2、PP-OKGC组HepG2细胞生长维持正常细胞形态,粘附、增殖、细胞活性及细胞功能均优于PP-N组。结论:Ⅰ型胶原覆层纤维载体具有良好的生物相容性和生物活性。
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