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A型流感病毒(Influenza A Virus)是一种重要的人畜共患病病毒,其宿主范围广,可以感染人、禽、猪、犬、马等多个物种;对人类健康及公共卫生安全造成了严重的威胁,同时也给农业生产造成极大的经济损失。如2009年在人群中大流行的H1N1流感病毒,其基因组被证实是含有猪源、人源和禽源流感病毒序列的三元重组病毒,这种基因组的混合与重排促进了该流感病毒的全球大流行。随着对流感病毒进一步的研究,能够产生与宿主免疫调节相关的蛋白受到高度关注;研究发现,PA-X和PB1-F2这两种蛋白由禽至哺乳动物的跨越种间传播的过程中,蛋白表达发生了不同长度的截短,对病毒致病性与传播性的影响显著。为了解PA-X与PB1-F2蛋白对pdm09 H1N1亚型猪流感病毒的复制能力及致病性的影响,本研究以一株编码截短形式PA-X和PB1-F2蛋白的H1N1亚型猪流感病毒为骨架,利用定点突变技术和反向遗传操作技术,成功构建并拯救了WT＿PAX-41/F2-11野生毒株和pdm09＿PAX-61/F2-11、pdm09＿PAX-41/F2-91及pdm09＿PAX-61/F2-91 3个突变毒株,通过比较4个毒株在体外细胞系及感染小鼠后的复制能力与致病性,来探究PA-X和PB1-F2基因在H1N1猪流感病毒中的影响。在体外培养MDCK及PK-15细胞系研究表明:pdm09＿PAX-61/F2-11和pdm09＿PAX-41/F2-91两个单突变毒株在MDCK细胞上早期复制能力降低,却增强了病毒在PK-15细胞上早期的复制能力;而pdm09＿PAX-61/F2-91双突变毒株则显著增强了病毒在MDCK和PK-15细胞上早期的复制能力,说明PA-X与PB1-F2蛋白存在宿主特异性且二者具有一定的协同作用。小鼠体内感染性试验研究表明:两个单突变毒株增强了病毒在小鼠的致病性和致死率,促进病毒在小鼠感染早期肺脏的复制能力,并诱导更高水平的炎性细胞因子表达,引起肺脏出现更严重的病理变化;双突变毒株则表现为协同效应。上述研究结果说明:PAX及PB1-F2基因不仅能够影响H1N1猪流感病毒的体外生物学特性,同时在调控猪流感病毒致病性中也起到了一定的作用,并揭示了不同长度的PA-X及PB1-F2蛋白在猪流感病毒中的功能差异;病毒在表达截短PA-X蛋白时,PB1-F2蛋白是否截短对病毒毒力未造成显著差异;而当病毒的PA-X蛋白表达全长时,表达不同长度的PB1-F2蛋白对病毒毒力的影响显著;当两种蛋白同时表达为全长时,病毒早期的复制能力及致病性均显著高于单一表达全长的突变毒株,却降低了病毒在动物体内持续感染的能力。本研究系首次在流感病毒中进行PA-X与PB1-F2蛋白的同时操作,这为阐明PA-X与PB1-F2蛋白之间的相互作用提供了理论基础。