【摘 要】
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红树植物角果木是一种生长在热带、亚热带海岸潮间带的植物,由于长期生长于高盐环境中而进化出一套特殊的耐盐机制。本实验以角果木作为研究对象,研究其抗氧化酶系在盐胁迫下
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红树植物角果木是一种生长在热带、亚热带海岸潮间带的植物,由于长期生长于高盐环境中而进化出一套特殊的耐盐机制。本实验以角果木作为研究对象,研究其抗氧化酶系在盐胁迫下的变化,并对编码这些酶系的基因进行了功能分析,为明确抗氧系统在植物抵御盐胁迫中的作用及机理提供理论基础。(1)用不同浓度的盐溶液处理两叶一心期的角果木不同时间,对其可溶性蛋白质含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性以及过氧化物酶(POD)活性进行测定,结果表明,这些抗氧化酶活性在盐胁迫下都有不同程度的增加,表明盐胁迫下角果木能通过增加抗氧化酶活性来降低盐胁迫引起的次级伤害。(2)采用数字表达谱技术对500mmol/L NaCl溶液处理不同时间点的差异表达基因进行了分析,对测序结果中的差异表达基因进行功能注释,根据功能注释的结果,从中候选了与抗氧化酶相关的编码基因2个(Mn-SOD和Cu/Zn-SOD)。根据转录组测序获得的全长cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术分离了角果木中两个超氧化物歧化酶基因Mn-SOD和Cu/Zn-SOD的全长cDNA序列。(3)分别构建这两个超氧化物歧化酶基因的酵母表达载体pYES2-Mn SOD和pYES2-Cu/Zn SOD,重组质粒转化到酿酒酵母菌INVSc Ⅰ。(4)对INVScⅠ (pYES2-Mn SOD)菌株和INVSc Ⅰ(pYES2-Cu/Zn SOD)菌株进行诱导,研究外源基因在酿酒酵母菌INVSc Ⅰ中的的表达情况。结果表明,INVSCⅠ (pYES2-Mn SOD)菌株和INVScⅠ (pYES2-Cu/Zn SOD)菌株经诱导后外源基因能够正常表达。(5)对酵母菌INVScⅠ (pYES2)菌株、酵母菌INVSc IⅠ(pYES2-Mn SOD)菌株和酵母菌INVScⅠ (pYES2-Cu/Zn SOD)菌株进行盐胁迫处理,结果表明,酵母菌INVScⅠ (pYES2-Mn SOD)菌株和酵母菌INVScⅠ (pYES2-Cu/Zn SOD)菌株的耐盐性明显高于对照酵母菌INVSCⅠ (pYES2)菌株,过表达超氧化物歧化酶对酵母菌细胞起到了保护作用,来源于角果木的这两个超氧化物歧化酶基因具有提高真核生物耐盐性的功能。
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