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目的:经穴-脏腑相关是中医经络学说的精髓,备受国内外学者瞩目。关于经穴-脏腑相关性的研究,多集中于干预经穴对脏腑生理功能或病理变化的靶向调节作用,机体生理功能或病理变化后体表经穴出现反映(反应)及规律性的总结较少。已有研究表明手厥阴心包经(穴)与心脏关联密切,表现为心脏生理功能或病理变化可相对特异地反应于体表心包经(穴);干预心包经(穴)可良性调节心血管生理功能或病理变化。其中针刺内关穴对缺血性心肌疾病的防治作用的研究甚多,多层次、多角度均验证了内关穴防治心肌缺血的确切疗效,但其效应机制仍未明确。电针(Electro-acupuncture,EA)广泛应用于各大系统疾病,其疗效得到肯定。频率是电针刺激的重要参数之一,普遍认为,不同电针频率具有不同的作用,目前不同的电针频率在镇痛以外的应用中尚未有统一的认识,但大部分的研究都支持低频电针对心肌缺血性损伤有保护作用。针刺治疗具有累积效应,表现为随着针刺次数的增加,治疗效应也随之提高,但目前有关针刺疗法效应与治疗次数之间关系的研究也多集中在针刺镇痛上,在其他方面应用的研究较少。皮肤是人体最大的器官之一,皮肤血流灌注量与机体状态密切相关,可反映脏腑血液循环情况。本课题组在既往研究中发现,心包经“内关穴”区皮肤血流灌注量可即时并特征性地反映当下心肌状态及其变化情况。心脏功能活动受交感神经支配,当急性心肌缺血时,交感神经去甲肾上腺素能血管收缩系统兴奋性增强,释放去甲肾上腺素、神经肽Y等递质,引起心肌收缩增强、能量消耗严重等一系列病理变化。同时,交感神经纤维分布广泛,皮肤血流灌注量也受交感神经的调控,其中交感缩血管神经对皮肤血管的缩血管神经支配最为丰富。已有研究发现经脉循行线上的皮肤组织中分布着比周围更多的交感神经末梢,针刺引起皮肤释放交感神经递质且有循经性,因此围绕交感神经及其相关物质的研究可能是经穴-脏腑相关性研究的突破点。本研究借助冠状动脉结扎法制备的心肌缺血损伤大鼠模型,对比观察低频电针相关经穴或非经非穴对缺血损伤病理态心肌的作用及其随治疗次数的变化,探讨低频电针经穴对心肌缺血的作用及其累积效应,为临床治疗提供实验依据;同时检测心肌处于不同状态(正常生理态、缺血损伤病理态和低频电针干预态)时,相关经穴与非经非穴区各自的皮肤组织中去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)、α1-肾上腺素能受体(alpha 1-adrenergic receptors,α1-AR)和 β2-肾上腺素能受体(beta 2-adrenergic receptors,β2-AR)含量的差异及其随低频电针治疗次数不同的变化,尝试从与交感神经递质及其相关受体的分子响应情况变化方面阐释经穴—脏腑相关的科学内涵,为经穴—脏腑相关理论研究开辟新的途径。方法:将100只健康雄性Wistar大鼠随机均分为1日治疗组和3日治疗组,每组再分为5小组,分别是正常组、假手术组、模型组、经穴组和非穴组,每小组各10只。于造模成功后第二天开始,经穴组和非穴组大鼠每日分别接受低频电针治疗1次,频率2 Hz,断续波,以大鼠肢体微微颤动为度,20min/次。分别于第1天或第3天低频电针治疗结束后,采用比色法检测大鼠血清CK-MB(CreatineKinase-MB,CK-MB)的含量,采用ELISA法分别检测大鼠血清cTnT(Cardiac Troponin T,cTnT)及穴区皮肤组织中NE、α1-AR和β2-AR的含量,并进行统计学处理分析。结果:1.血清心肌酶的变化情况心肌缺血损伤时,大鼠血清cTnT、CK-MB含量较正常组大鼠显著升高(P<0.01)。低频电针“内关”穴后大鼠血清cTnT、CK-MB含量较模型组大鼠显著降低(P<0.01),低频电针非穴对实验大鼠因心肌缺血而升高的血清cTnT及CK-MB含量无明显影响(P>0.05)。2.各穴区皮肤组织中NE、α1-AR和β2-AR含量的变化情况内关穴区:在正常情况下,“内关”穴区NE、α1-AR、β2-AR含量较“非穴”区呈偏低趋势。大鼠心肌缺血损伤时,“内关”穴区NE、α1-AR含量显著升高(P<0.01),β2-AR含量显著降低(P<0.01)。低频电针“内关”穴后,“内关”穴区的NE、α1-AR含量显著降低(P<0.01),β2-AR含量显著升高(P<0.01);低频电针“非穴”后,“内关”穴区NE、α1-AR及β2-AR含量无明显变化(P>0.05)。非穴区:心肌缺血损伤时,“非穴”区NE、α1-AR及β2-AR含量无明显变化(P>0.05)。低频电针“内关”穴后,“非穴”区NE、α1-AR及β2-AR含量无明显变化(P>0.05);低频电针“非穴”后,“非穴”区的NE、α1-AR及β2-AR含量无明显变化(P>0.05)。3.低频电针治疗一次、三次对比3.1血清心肌酶三日组各组大鼠血清cTnT、CK-MB的均值整体高于一日组。与各组心肌缺血大鼠模型血清cTnT、CK-MB含量相比,低频电针内关穴三次后,经穴组大鼠血清cTnT、CK-MB含量下降更多。3.2NE、α1-AR 和 β2-AR 含量低频电针“内关”穴:低频电针“内关”穴一次、三次后“内关”和“非穴”区的NE、α1-AR和β2-AR含量无明显差异(P>0.05)。低频电针“内关”穴一次或三次对穴区交感神经相关物质含量水平所产生的效应趋势相同。低频电针“非穴”:对比低频电针“非穴”一次、三次后“内关”和“非穴”区的NE、α1-AR和β2-AR含量无明显差异(P>0.05)。结论:(1)低频电针“内关”穴对大鼠心肌缺血损伤有保护作用低频电针心肌缺血损伤大鼠“内关”穴后,可以恢复血清cTnT、CK-MB含量,说明低频电针“内关”穴可以改善心肌缺血损伤,从而对心肌具有一定的保护作用,内关穴对心脏具有相对特异性作用。(2)内关穴区皮肤组织中的交感神经相关物质具有随心肌不同状态而变化的特征在正常情况下,“内关”穴区皮肤组织中的NE、α1-AR、β2-AR含量较“非穴”区偏低趋势;在病理情况下“内关”穴区皮肤组织中的NE、α1-AR升高,β2-AR下降;低频电针干预“内关”后,NE、α1-AR降低,β2-AR升高。提示“内关”穴区皮肤组织中NE、α1-AR、β2-AR含量有随着大鼠心肌状态的不同而变化的趋势。(3)低频电针的治疗次数对经穴效应有一定的影响低频电针不同次数对大鼠血清cTnT、CK-MB的含量有一定影响,低频电针“内关”穴三次后,大鼠血清cTnT、CK-MB的含量相对模型组下降更多。提示低频电针内关穴的效应有随着治疗次数的增多而提高,具有一定的针刺累积效应。低频电针一次或三次对内关穴区、非穴区交感神经相关物质的含量无明显差异,但从整体上来看,低频电针一次或三次对穴区交感神经相关物质含量水平所产生的效应趋势相同。