【摘 要】
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目的:本研究拟在构建三维口腔黏膜模型（3-dimensional oral mucosa model,3D OMM）的基础上,研究不同成型技术口腔修复高分子材料对口腔黏膜细胞增殖及细胞凋亡和自噬相关标志物表达情况的影响,为临床中口腔修复高分子材料的选择提供实验依据。方法:（1）本研究分别将人牙龈成纤维细胞（Human gingival fibroblasts,HGFs）和人口腔角质细胞（Human
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目的:本研究拟在构建三维口腔黏膜模型（3-dimensional oral mucosa model,3D OMM）的基础上,研究不同成型技术口腔修复高分子材料对口腔黏膜细胞增殖及细胞凋亡和自噬相关标志物表达情况的影响,为临床中口腔修复高分子材料的选择提供实验依据。方法:（1）本研究分别将人牙龈成纤维细胞（Human gingival fibroblasts,HGFs）和人口腔角质细胞（Human oral keratinocytes,HOKs）种植于基质胶（Matrigel）中,分层三维共培养后建立基于Matrigel的3D OMM。实验选用7种口腔修复高分子材料分别为注塑、计算机辅助设计/计算机辅助制作（Computer Aided Design/Computer Aided Manufacturing,CAD/CAM）、3D打印的义齿基托材料和化学固化、CAD/CAM的树脂冠桥材料以及压铸、CAD/CAM的聚醚醚酮基（Polyetheretherketone,PEEK）生物高性能聚合物（Biological high-performance polymer,Bio-HPP）材料。根据ISO标准,将7种高分子材料圆片状试件在37℃条件下用细胞培养液浸提72 h,制备浸提液;（2）收集浸提液并持续刺激构建完成的3D OMM 72 h,采用CCK-8法（Cell Counting Kit-8）检测浸提液对口腔黏膜细胞增殖情况的影响;（3）收集浸提液并持续刺激构建完成的3D OMM 72 h,随后对刺激完成后的3D OMM组织进行固定并制作石蜡切片,采用原位缺口末端标记法（Td T-mediated d UTP nickend labeling,TUNEL）/凋亡相关蛋白Caspase-3免疫荧光双重染色（Immunofluorescence double staining）和自噬相关蛋白p62/LC3B免疫荧光双重染色检测口腔黏膜细胞凋亡和自噬的情况。结果:（1）CCK-8法检测结果表明:7种材料实验组的光密度（Optical density,OD）值彼此之间,差异无统计学意义（P>0.05）;且各实验组的OD值与阴性对照组OD值之间相比,差异均无统计学意义（P>0.05）,各组细胞相对增殖率（Relative growth rate,RGR）均大于85%,所有材料均无明显细胞毒性;（2）免疫荧光双重染色法结果表明:注塑义齿基托材料组TUNEL阳性率最高,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P0.05）,且7组间的差异亦无统计学意义（P>0.05）。结论:（1）7种不同成型技术口腔修复高分子材料均未对口腔黏膜细胞增殖产生明显影响;（2）蛋白及分子水平的评价手段研究口腔修复高分子材料对口腔黏膜细胞的影响可能比整体细胞水平上更加灵敏;（3）注塑义齿基托材料可引起口腔黏膜细胞晚期凋亡水平的升高,而其余6种材料未对口腔黏膜细胞晚期凋亡水平产生明显影响;（4）7种不同成型技术口腔修复高分子材料均未对口腔黏膜细胞早期凋亡和自噬水平产生明显影响。
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