核苷酸是组成生命中核酸大分子的基本结构单位,是人类在代谢上极为重要的生命物质,它几乎参与细胞的所有代谢过程。婴幼儿处于快速生长发育的时期,体内合成的核苷酸可能不能满足这些重要组织生长的需要,将核苷酸添加到婴幼儿配方粉中已成一种趋势,然而在现行的国家相应标准中并未建立核苷酸的检测方法。因此,本文提出了运用反相高效液相色谱的方法测定奶粉中5种游离核苷酸含量的新方法,并研究了婴幼儿配方奶粉中核苷酸在货架期内的稳定性,主要研究内容结果如下。1、反相高效液相色谱测定婴幼儿奶粉中5种核苷酸对5种目标核苷酸标准品的色谱条件进行优化,包括色谱柱的选择、流动相种类及比例的优化、p H值、离子对试剂种类等因素对分离的影响,最终选用色谱柱:Welch NCOT-C18(300×4.6mm,5μm);检测波长为254nm;流动相为1.4mmol/L四丁基硫酸氢铵磷酸盐缓冲溶液(p H3.3)和体积分数为5%的甲醇。以5种目标核苷酸提取总量及样品与杂质峰的分离程度为考察目标,根据婴幼儿配方奶粉的特点,确定最佳前处理方法为:超声提取时间为10min,经13%高氯酸溶液去除蛋白,在该测定条件下,可以很好的将5种核苷酸与样品中的杂质峰分离。2、方法验证通过准确度、精密度、线性范围、检出限、定量限、不确定度研究来考察方法的可行性。结果表明,此法平均回收率为96%~105%,精密度为0.95%~3.33%,5种核苷酸浓度在1.25~10.0μg/m L范围内与其目标峰面积呈良好的线性关系R2≥0.999;胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、次黄嘌呤核苷酸的检出限分别是0.06mg/100g、0.01mg/100g、0.04mg/100g、0.02mg/100g、0.01mg/100g;定量限分别是0.19mg/100g、0.04mg/100g、0.12mg/100g、0.07mg/100g、0.05mg/100g;标准不确定度为5.55%,扩展不确定度为11.1%,方法中各项验证指标良好。3、核苷酸货架期内的稳定性检测0~6个月、6~12个月的婴幼儿配方粉产品,研究储藏时间对婴幼儿配方粉中5种核苷酸的稳定性的影响。研究结果表明:样品在室温、避光的条件放置6个月、12个月后,产品保质期内未发生任何不良反应,产品质量稳定性较好,核苷酸总含量在产品保质期内也无明显的变化。