【摘 要】
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第一部分:隐球菌性脑膜炎患者脑脊液mNGS及P-tau181在诊断中的应用目的:1.探讨脑脊液宏基因组下一代测序技术（mNGS）在隐球菌性脑膜炎（CM）诊断中的价值。2.评估脑脊液中P-tau181在以认知障碍为主要临床表现的CM与阿尔茨海默病（AD）鉴别诊中的诊断价值。方法:1.本研究选取了2018年1月～2022年1月就诊于河北医科大学第二医院的24例CM患者的脑脊液进行研究。2.采用mNGS
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第一部分:隐球菌性脑膜炎患者脑脊液mNGS及P-tau181在诊断中的应用目的:1.探讨脑脊液宏基因组下一代测序技术（mNGS）在隐球菌性脑膜炎（CM）诊断中的价值。2.评估脑脊液中P-tau181在以认知障碍为主要临床表现的CM与阿尔茨海默病（AD）鉴别诊中的诊断价值。方法:1.本研究选取了2018年1月～2022年1月就诊于河北医科大学第二医院的24例CM患者的脑脊液进行研究。2.采用mNGS方法检测CM患者脑脊液中病原微生物的DNA序列,探讨mNGS在CM诊断中的价值。3.使用超灵敏单分子阵列（Simoa）方法分析CM患者脑脊液中P-tau181的浓度,评估脑脊液中P-tau181在以认知障碍为主要临床表现的CM与AD的鉴别诊中的价值。结果:1.24例CM患者中18例mNGS阳性,检出率为75%（18/24）,菌种均为新型隐球菌。其中1例患者脑脊液培养提示为浅白隐球菌,mNGS检测确诊为新型隐球菌。另外1例患者脑脊液培养提示为浅白隐球菌,mNGS检测为阴性。2.以认知障碍为主要临床表现的CM患者脑脊液中P-tau181水平显著低于AD患者。结论:1.mNGS（75%）与脑脊液细胞学（阿利新蓝染色与MGG染色）（75%）检出率一致,与临床特征及传统实验室检测方法结合可以有效的提高CM的检出率。此外,mNGS在鉴别菌种方面也具有特异性。2.脑脊液中P-tau181可以作为早期鉴别以认知障碍为主要临床表现的CM与AD的一个临床指标,为以认知障碍为主要临床表现的CM患者的早期诊断及治疗提供可靠的依据。第二部分:钙钛矿纳米颗粒在神经胶质瘤细胞中的荧光示踪作用目的:提高全无机铯铅卤化钙钛矿（CsPbX3 NCs,X=Cl,Br和I）的水稳定性,提高生物相容性,促进其在肿瘤细胞荧光示踪等生物医学领域的应用。方法:1.利用临界状态的零维Cs4Pb Br6纳米颗粒（NCs）水触发原理,产生部分CsPbBr3,得到CsPbBr3:Cs4Pb Br6 NCs,再将壳聚糖包裹在部分相变的钙钛矿纳米颗粒表面,从而得到壳聚糖包覆的CsPbBr3:Cs4Pb Br6 NCs（CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS）。2.利用XRD、XPS、FTIR、PL、UV、TEM、HR-TEM、SEM、FT-SAED、EDS等对合成的CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS进行结构和性能表征。3.培养神经胶质瘤细胞与CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS共孵育,通过共聚焦成像观察CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS是否成功转入胶质瘤细胞。4.利用CCK8法、Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒以及流式细胞术评估CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS的细胞毒性作用。结果:1.合成的CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS纳米颗粒尺寸约为5-30nm。壳聚糖的包覆作用不仅可以提高CsPbBr3:Cs4Pb Br6 NCs在水中的溶解性,使其可以均匀的分散于水中,而且有效的阻挡了水对CsPbBr3:Cs4Pb Br6 NCs的破坏,极大的改善了CsPbBr3:Cs4Pb Br6 NCs在水环境中的荧光性能,使其在水中的荧光性能能保持35天以上,并且随着时间的推移CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS的荧光性能会出现一个缓慢增强的过程。2.壳聚糖的包覆作用使CsPbBr3:Cs4Pb Br6 NCs对神经胶质瘤细胞几乎无毒性（细胞存活率＞90%）,共聚焦成像图片显示CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS均匀的分散于神经胶质瘤细胞胞质中。因此,CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS可以成功地应用于细胞荧光成像。结论:1.CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS具有优越的荧光性能、超强的水稳定性。2.CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS具有良好生物相容性,细胞毒性实验结果表明CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS对神经胶质瘤细胞几乎无毒性作用。3.神经胶质瘤细胞对CsPbBr3:Cs4Pb Br6@CS具有良好的摄取率,可以作为一种安全、高效、稳定的荧光示踪剂应用于神经胶质瘤细胞的荧光成像。
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