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目的： 观察益髓灸对D-半乳糖衰老小鼠海马组织Klotho对胰岛素受体底物 1（IRS-1）、蛋白激酶 B（protein kinase，Akt)、叉头框蛋白O3(Forkhead box O3，FOXO3a)mRNA及蛋白表达的影响及作用机制，为临床应用提供实验依据。 方法： 将60只30±2g雄性KM小鼠随机分为5组随机分为生理盐水组、模型组、足三里组、百会组、非穴位组，每组12只。模型组和各干预组给予 D-半乳糖皮下注射建立衰老小鼠模型，生理盐水组注射等量的生理盐水。三个干预组于造模第13天开始于相应穴位进行艾灸，生理盐水组、模型组仅予同等程度的捉抓。造模前后采用Morris水迷宫实验对5组小鼠进行行为测试。治疗结束检测小鼠海马组织Klotho、IRS、Akt、FOXO3a mRNA及蛋白水平。 结果： （1）造模后，模型组潜伏期较生理盐水组、百会组、足三里组延长（P＜0.05）,非穴位组潜伏期较百会组、足三里组延长，但无显著性差异P＞0.05）。（2）与生理盐水组比较，模型组、非穴组Klotho、IRS mRNA及蛋白表达降低，Akt1、FOXO3a mRNA表达水平增高（P＜0.05）；与模型组比较，足三里组及百会组Klotho、IRS mRNA表达水平增高，Akt1、FOXO3a mRNA表达水平降低（P＜0.05），非穴位组则未见明显改变（P＞0.05）。（3）与生理盐水组比较，模型组海马组织Klotho、p-IRS-1、Akt、FOXO3a蛋白水平降低（P＜0.05），IRS-1、p-Akt、p-FOXO3a蛋白水平升高（P＜0.05）；与模型组比较，足三里组及百会组Klotho、p-IRS、Akt、FOXO3a蛋白水平升高（P＜0.05），IRS-1、p-Akt、p-FOXO3a蛋白水平降低（P＜0.05）；而非穴位组除p-Akt蛋白外则未见明显改变（P＞0.05）。 结论： 益髓灸的早期干预可能通过上调klotho、IRS-1 mRNA水平，促进D-半乳糖模型小鼠海马klotho蛋白表达，激活IRS-1的丝氨酸抑制性位点，而负性调控下游的Akt活性而下调其底物FOXO3a的磷酸化表达，从而发挥延缓脑衰老的作用。