【摘 要】
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背景及目的乳腺癌大多数是雌激素依赖性的,luminal型乳腺癌较其他类型复发风险低,但仍有少数患者出现复发转移。对于此类患者预后目前缺乏有效的预测指标。许多研究报道外周血白细胞数量可以大致反应人体的免疫状态。一些血常规参数可以作为结直肠癌、肺癌、胃癌、肝癌患者的独立预后指标。目前这些外周血常规参数是否与luminal型乳腺癌患者预后密切相关,尚缺乏相关的临床研究。本研究旨在luminal型乳腺癌患
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背景及目的乳腺癌大多数是雌激素依赖性的,luminal型乳腺癌较其他类型复发风险低,但仍有少数患者出现复发转移。对于此类患者预后目前缺乏有效的预测指标。许多研究报道外周血白细胞数量可以大致反应人体的免疫状态。一些血常规参数可以作为结直肠癌、肺癌、胃癌、肝癌患者的独立预后指标。目前这些外周血常规参数是否与luminal型乳腺癌患者预后密切相关,尚缺乏相关的临床研究。本研究旨在luminal型乳腺癌患者中探究一些外周血常规参数对患者免疫状态的预测作用,确定其相应的最佳诊断值来评估luminal型乳腺癌患者的预后,并进一步探究其相关的机制。方法回顾性分析259例接受规范治疗的luminal型乳腺癌患者的临床病理资料。使用ROC统计学方法评估淋巴细胞绝对值(ALC)、单核细胞绝对值(AMC)、淋巴细胞与单核细胞比值(LMR)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)对luminal型乳腺癌患者预后的有效性。低LMR组和高LMR组luminal型乳腺癌患者的临床病理资料之间的比较使用卡方检验或者Fisher精确检验,连续变量如淋巴细胞数值、单核细胞数值使用Wilcoxon秩和检验方法比较。将LMR和化疗方案进行Kaplan-Meier生存分析,组间比较用log-rank检验。所有因素采用Cox比例风险模型分析。流式细胞仪检测上述患者外周血CD8+T细胞数量和功能相关指标。将体外分离的CD8+T细胞与MCF-7细胞共培养,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率,加入Fas L抗体,观察肿瘤细胞凋亡变化情况。应用荧光定量PCR方法检测经过5氟尿嘧啶(5-FU)处理过的MCF-7、T47D乳腺癌细胞中Fas表达情况。将5-FU处理后的MCF-7细胞与不同浓度的CD8+T共培养后,WST-1法检测CD8+T对肿瘤细胞的杀伤情况。应用Western blot方法检测共培养后MCF-7乳腺癌细胞Fas表达情况和CD8+T细胞Fas L表达情况。培养体系中加入Fas L抗体,观察CD8+T对肿瘤细胞作用的变化情况。实验数据采用双侧t检验对组间差异进行分析。结果分别比较上述血液学参数的ROC曲线,LMR对luminal型乳腺癌复发有较好的诊断价值(P=0.006)。通过LMR的ROC曲线,得出5.2为LMR的最佳分界值。其他血液学指标均无统计学意义。将患者分为术前高LMR组:(LMR≥5.2)和低LMR组(LMR<5.2)。高LMR组患者的无病生存时间显著长于低LMR组患者(P=0.001)。当luminal型乳腺癌患者的LMR≥5.2时,淋巴结阴性的患者使用CEF方案比使用CE方案化疗无病生存时间略长,但差异无统计学意义。而淋巴结阳性的患者使用CEF方案比使用CE方案化疗无病生存时间明显延长(P<0.05)。单因素和多因素统计学分析,结果显示:单因素分析中,LMR[危险比(HR)=0.560;95%CI,0.395–0.793;P=0.001];淋巴结转移情况(HR=1.748;95%CI,1.167–2.620;P=0.007)是潜在的预测患者复发情况的指标。多因素分析中,LMR(HR=0.582;95%CI,0.408–0.831;P=0.003)是一个能够独立预测患者复发的指标。LMR≥5.2患者组较LMR<5.2患者组,外周血CD8+T细胞数量增多、功能(IL-2、TNF-ɑ、IFN-γ、MIP-1β、CD107ɑ)增强(P<0.05)。CD8+T细胞可以通过Fas/Fas L途径诱导肿瘤细胞凋亡。经过5-FU处理过的MCF-7、T47D乳腺癌细胞比对照组细胞,Fas表达明显增高(P<0.01,P<0.01)。将5-FU处理过的肿瘤细胞分别与不同浓度的CD8+T细胞共培养,结果显示5-FU的肿瘤杀伤作用随着CD8+T细胞数量增多而增强。结论(1)LMR与外周血CD8+T细胞数量正相关,有望成为辅助判断luminal型乳腺癌患者预后的指标。(2)5-FU类药物具有增强雌激素受体阳性肿瘤细胞Fas表达作用,LMR增高的luminal型淋巴结阳性的患者有望从含5-FU化疗方案中获益。
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