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中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)隶属节肢动物门(Arthropod)、甲壳纲(Crustacea)、十足目(Decapoda)、方蟹科(Grapsidae),是我国重要的经济蟹类之一。雄性中华绒螯蟹精子核为非浓缩核,染色质不同于一般动物精子核的致密结构,且形成机制未知。组蛋白作为核小体的重要组成部分,其翻译后修饰产物、组蛋白变体对蛋白质和DNA结合程度、DNA转录水平产生影响,进而调控染色质或染色体的结构,发挥所需生物学功能。同时在体内,分子伴侣对组蛋白与DNA形成正确构象的核小体具有辅助作用。为探究中华绒螯蟹精子发生过程中非浓缩核形成的原因,本文以保守性低的组蛋白H1为切入点,研究其变体组蛋白H1.1等、分子伴侣核质蛋白1-假基因9(Nucleophosmin1 pseudogene9,NPM1P9)、核小体组装蛋白1样1(Nucleosome assembly protein 1 like 1,NAP1L1)在精子发生过程的表达和动态分布特征。同时,研究组蛋白H1与分子伴侣NPM1P9间的相互作用,旨在从分子和细胞水平进行全面探究。本研究利用分子克隆技术,构建H1、H1.1和NPM1P9的表达载体并表达相应蛋白;利用单克隆抗体制备技术获得组蛋白H1单克隆抗体(Monoclonal antibody H1,McAb-H1)和组蛋白H1.1单克隆抗体(Monoclonal antibody H1.1,McAb-H1.1);通过免疫印迹、免疫荧光技术探究它们在精子发生过程中的表达及动态分布特征;利用实时荧光定量PCR探究H1与H1.1基因在心脏、肌肉、肝胰腺、精巢中的相对表达;通过生物信息学分析组蛋白H1和H1.1的氨基酸组成和蛋白结构;利用免疫共沉淀技术探究组蛋白H1与其分子伴侣NPM1P9间的相互作用。实验结果表明:成功构建H1、H1.1和NPM1P9的表达载体,经转化、诱导、纯化,成功在体外表达组蛋白H1、H1.1和NPM1P9蛋白;经小鼠免疫、细胞融合获得McAb-H1和McAb-H1.1,其效价均达到1:204800以上。在中华绒螯蟹精子发生过程中,精巢中存在组蛋白H1、磷酸化修饰的组蛋白H1.1;精子中可能存在组蛋白H1、H1.1相应剪接变体H1-delta-like、H1-delta。在精巢中,H1.1基因较H1基因表达量高,且呈显著性差异(P<0.05);H1.1基因在精巢中的表达量较心脏、肌肉、肝胰腺中的高,且呈极显著性差异(P<0.01)。精子发生过程中,NPM1P9、NAP1L1蛋白从细胞质向细胞核转移,且精子中可能存在NPM1P9变体;同时,组蛋白H1和其分子伴侣NPM1P9存在相互作用。本研究为解释中华绒螯蟹精子发生过程中,组蛋白H1、H1变体及其分子伴侣对精子核染色质的包装、非浓缩核的形成奠定基础;同时,为研究其他十足目动物精子提供参考和借鉴。