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研究目的:建立一种基于实时荧光PCR(Real-time PCR)平台的检测新技术，能够在一个反应管内快速准确地同时检测克氏综合征与Y染色体微缺失。从而建立一种廉价、易行、高通量的针对非梗阻性无精少精症的主要遗传因素检测新方法，为男性不育的科学治疗与预后提供有效的指导工具。以多重实时荧光PCR技术在克氏综合征与Y染色体微缺失检测中的临床应用评估。并探讨厦门地区克氏综合征与Y染色体微缺失发病情况。 研究方法:分别针对Y染色体上ZFY、AZFa、AZFb、AZFc四个区域内的目标序列设计四对检测引物与对应的四条检测探针。四条探针分别采用FAM、HEX、ROX和CY5荧光基团标记，通过实时PCR反应，建立可在单一个反应管内同时对克氏综合征与Y染色体微缺失进行双重验证的四重PCR反应体系。应用多重实时荧光PCR技术，对1624例就诊我院的非梗阻性无精少精症患者，进行克氏综合征以及AZFa，AZFb，AZFc区共六个序列标记位点(STS)的微缺失分析，结果与对照方法进行比较。 研究结果:成功建立检测克氏综合征与Y染色体微缺失的四重PCR反应体系。同时它们均具有高诊断率及良好的灵敏度和特异性。在克氏综合征(47，XXY)和正常男性(46，XY)的模板DNA在2ng到100ng之间时，NRP值是无重叠的。因此，检测47，XXY的四重试验法，对基因组DNA模板量应用范围较宽，其检测最低量为2 ng。此外，我们发现25ng的DNA是检测克氏综合征的最佳模板量。以多重实时荧光PCR技术检测克氏综合征的患病率为3.33％;Y染色体微缺失的患病率为5.23％。在AZF缺失的各类型比较中，以AZFc区微缺失占的比例最高为61.18％，其次为AZFb+c区微缺失占的比例为22.35％。 研究结论:我们构建的克氏综合征和Y染色体微缺失与四重PCR结合的检测方法，实现了快速、准确、廉价的特点。能避免琼脂糖凝胶电泳分析方法所遇到的PCR产物的污染，同时与现有的分子的方法，如染色体微数组分析(CMA)，下一代测序(NGS)，荧光定量PCR(QF-PCR)等相比，不但可显着降低操作过程的时间，也可明显降低实验耗费，实验结果可靠性高，使克氏综合征和Y染色体微缺失的分子检测更加经济有效。多重实时荧光PCR技术应用于克氏综合征和Y染色体微缺失的检测技术实现了快速、准确、高通量的检测优点，为日后检测非梗阻性无精少精症遗传因素方面提供良好的检测平台。